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1、熒光定量PCR檢測HBV作者：張蓓，楊曉云，劉蕊，紀(jì)鳳祥【關(guān)鍵詞】常規(guī)檢查；,,HBV-DNA；,,熒光定量PCR 摘要：目的：探討HBV-DNA的檢出情況與乙肝兩對半結(jié)果之間的關(guān)系。方法：運(yùn)用熒光定量PCR（FQ-PCR）檢測307例疑似乙肝患者血清中的HBV-DNA，同時運(yùn)用ELISA方法進(jìn)行兩對半指標(biāo)的檢測，并對結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性探討。結(jié)果：HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)組（大三陽組）患者血清HBV-DNA檢出率為98.15%（53/54），平均拷貝數(shù)為7.56E+06/ml；HBsAg(
2、+)HBeAb(+)HBcAb(+)組（小三陽組）患者血清HBV-DNA檢出率為27.78%（15/54），平均拷貝數(shù)為3.79E+05/ml；HBsAg(+)HBcAb(+)組血清HBV-DNA檢出率為91.18%（31/34），平均拷貝數(shù)為2.85E+05/ml，小三陽組HBV-DNA陽性檢出率及拷貝數(shù)均低于大三陽組，且與大三陽組比較均具有顯著性差異（P<0.01，P<0.05）；HBsAb(＋)組血清HBV-DNA檢出率為1.6%(1/63)，平均拷貝數(shù)為1.13E+08/ml；HBcAb(+
3、)組血清HBV-DNA檢出率為16.67%(1/6)，平均拷貝數(shù)為3.00E+04/ml；HBsAb(＋)HBeAb(＋)HBcAb(＋)組血清HBV-DNA檢出率為12.50%(4/32)，平均拷貝數(shù)為3.00E+05/ml；HBsAg(+)組血清HBV-DNA檢出率為0（0/2）；HBV-M全陰性組HBV-DNA檢出率為1.61%（1/62），平均拷貝數(shù)為2.75E+05/ml。結(jié)論：HBV-M陰性患者仍有HBV-DNA陽性者，因此在檢測中應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用兩種方法進(jìn)行檢測，提高檢出率，避免漏診，為臨床HBV感染、
4、復(fù)制及傳染性的判斷以及指導(dǎo)治療提供更為可靠的判定依據(jù)?！ ￡P(guān)鍵詞：常規(guī)檢查；HBV-DNA；熒光定量PCR CorrelationofDetectionofHBV-DNAbyFluorescentQuantitativePCRinedsamplesfrom307suspectedcasesofhepatitisB.MeanethodseancopynumberlinpatientsofHBsAg(+),HBeAg(+)andHBcAb(+)(groupA),27.78%（15/54）and3.79E+05/m
5、linpatientsofHBsAg(+),HBeAb(+)andHBcAb(+)(groupB),91.18%（31/34）and2.85E+05/mlinpatientsofHBsAg(+)andHBcAb(+)(groupC).The2parametersore,theylinpatientsofHBsAb(＋),16.67%(1/6)and3.00E+04/mlinpatientsofHBcAb(+),12.50%(4/32)and3.00E+05/mlinpatientsofHBsAb(＋),HBeA
6、b(＋)andHBcAb(＋),0(0/2)inpatientsofHBsAg(+)and1.61%（1/62）and2.75E+05/mlinHBV-M-negativepatients.Conclusion：HBV-DNApositivitymayappearinHBV-M-negativepatients.Therefore,the2methodsshouldbesimultaneouslyusedinthedetectionofHBVinfectiontopromotethedetectingratet
7、oprovidemorereliableevidenceforjudgmentofHBVinfection,duplicationandinfectivityanditstreatmentinclinicalpractice. Keyl，最高拷貝數(shù)為7.70E+09copy/ml。 2.2HBV-DNA定量測定與HBV-M的關(guān)系，見表1?！ ”?ELISA法檢測HBV-M和熒光定量PCR檢測HBV-DNA結(jié)果（略） 注：*與大三陽組比較P<0.01，#與大三陽組比較P<0.05 3討論
8、 FQ-PCR是進(jìn)行臨床基因診斷的有效手段，它采用了完全閉管檢測，不需要PCR后處理，避免了交叉感染；同時采用實時檢測技術(shù)，所得Ct值和原始模板數(shù)量完全呈線形相關(guān)，定量準(zhǔn)確率極高［3］，它不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于熒光探針的應(yīng)用，可以通過光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測PCR擴(kuò)增過程中熒光信號的變化以獲得定量結(jié)果，所以還具有DNA雜交的高特異性和光譜的高精確性，克服了常規(guī)PCR的許多缺
