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1、HCV感染者IgG/IgM論文【關(guān)鍵詞】免疫紊亂摘要:目的初步探討IgG/IgMTCIC在HCV感染者體內(nèi)的意義。方法采用捕捉法ELISA，以抗人IgG的羊IgG為包被抗體，HRP抗人IgM的羊IgG為指示抗體，檢測(cè)80例HCV感染者及30例健康人體內(nèi)IgG/IgMTCIC的水平。結(jié)果HCV感染組IgG/IgMTCIC的水平顯著高于健康對(duì)照組（P0.01）；進(jìn)一步比較與ALT及BT的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)IgG/IgMTCIC與兩者均無明顯關(guān)系（P0.05）。結(jié)論IgG/IgMTCIC并不直接參與肝臟損傷的病理過程，而可能是丙肝
2、患者體液免疫紊亂的重要指征。關(guān)鍵詞:HCV；IgG/IgMTCIC；ELISA；免疫紊亂Abstract:ObjectiveTopreliminarilyelucidatethesignificanceofIgG/IgMTCICinHCVinfectedindividuals.MethodsCoatededtohumanIgG，andthendetectedbyHRPlabeledgoatIgGaimedtohumanIgM，acaptureELISAmethodinethecirculatingimmuneplex
3、esposedofIgGandIgM(i.e.IgG/IgMTCIC)inHCVinfectedindividuals(80cases)andhealthyindividuals(30cases).ResultsThelevelofIgG/IgMTCICinHCVinfectedindividualsofHCVinfectedindividuals.ConclusionItageofliver,ightbeanimportantindicationthatreflectedthedisorderedstatusofh
4、umoralimmuneresponse.Keymunologicderangement自雙特異性循環(huán)免疫復(fù)合物(tinedcirculatingimmuneplexes,TCIC)的概念提出以來［］.freela)。1.2研究對(duì)象HCVRNA陽性血清標(biāo)本80例（其中男性37例，女性43例），采自廣州市傳染病醫(yī)院；另取30份健康體檢者血清標(biāo)本作為對(duì)照組。1.3檢測(cè)方法1.3.1檢測(cè)IgGIgM雙特異性免疫復(fù)合物捕捉法ELISA的操作過程用0.1mol/L，pH9.6的碳酸緩沖液將抗人IgG的羊IgG稀釋至7.5μg/
5、mL，加入反應(yīng)板，每孔0.1mL，4℃18-24h，用0.01mol/L,pH7.4PBST洗滌3次，加入用生理鹽水按1∶75稀釋的血清標(biāo)本，每孔0.1mL，4℃18-24h，同上洗滌；用含25%兔血清的PBST將HRP抗人IgM的羊IgG作1∶3200稀釋，每孔0.1mL，37℃1h，同上洗滌；加入TMBH2O2底物溶液，每孔0.1mL，37℃避光反應(yīng)45min；2mol/L的H2SO4終止反應(yīng)，最后在BIORAD680全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國產(chǎn)品)上測(cè)OD值。每塊反應(yīng)板分別以混合人血清和羊血清作陽陰性對(duì)照。1.3.2A
6、LT測(cè)定方法按試劑盒說明進(jìn)行。1.3.3黃疸指數(shù)（BT）測(cè)定方法按衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床操作規(guī)程進(jìn)行。2結(jié)果與分析2.1本ELISA法的特異性2.1.1阻斷實(shí)驗(yàn)隨機(jī)取血清標(biāo)本20份，同時(shí)設(shè)阻斷組和對(duì)照組。在加入HRP抗人IgM的羊IgG前，阻斷組先加入用PBST按100μg/mL稀釋的抗人IgM的羊IgG，對(duì)照組加入PBST，37℃1h，其余操作步驟同前，最后按同份血清阻斷孔與對(duì)照孔的測(cè)定結(jié)果來計(jì)算其阻斷率。結(jié)果20份標(biāo)本的阻斷率均大于50%。2.1.2替代實(shí)驗(yàn)取豬、兔、鴨和牛血清代替人血清標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果所有標(biāo)本與作陰
7、性質(zhì)控的羊血清無異，其OD值均穩(wěn)定在0.00～0.05之間。2.2ELISA的重復(fù)性結(jié)果表明，本ELISA法的變異系數(shù)均小于10%。2.3HCV感染者IgG/IgMTCIC的檢測(cè)HCVRNA陽性血清IgG/IgMTCIC的±s為092±0.11，而健康人血清為0.65±0.08，前者顯著高于后者（P0.01）。2.4HCV感染者IgG/IgMTCIC與ALT的關(guān)系在80例HCV感染者中，ALT正常者21例，升高者59例。經(jīng)相關(guān)分析，ALT與IgG/IgMTCIC無相關(guān)（r=0.18,P＞0.05）。2.5HCV感染者
8、IgG/IgMTCIC與BT的關(guān)系80例標(biāo)本中，有58例檢測(cè)了BT,其中BT正常者40例，升高者18例。經(jīng)相關(guān)分析，BT與IgG/IgMTCIC無相關(guān)（r=016,P＞0.05）。3討論本文采用抗人IgG的羊IgG為包被抗體，HRP抗人IgM的羊IgG為指示抗體，建立了檢測(cè)IgG/IgMTCIC的捕捉法ELISA。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本法特異性強(qiáng)，重
