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《成人脂肪間充質(zhì)干細胞體外定向誘導分化為心肌樣細胞的實驗觀察》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、成人脂肪間充質(zhì)干細胞體外定向誘導分化為心肌樣細胞的實驗觀察.L.編輯。作者：張衛(wèi)澤，陳躍武，哈小琴，陳永清，秦勉，馬凌，郭建巍，洪志斌【關(guān)鍵詞】成人脂肪【Abstract】AIM:Toexplorethemethodsofisolatingandculturingmesenchymalstemcellsfromadultadiposetissue（ADMSCs）andinducingthemtodifferentiateintocardiomyocytesinvitro,soastoestablishaneyocar
2、dialregeneration.METHODS:MSCsadultadiposetissue.5azacytidine(5aza)inducedthosecellstodifferentiateintocardiomyocytes.ThentheimmunocytochemicalmethodandtheRTPCRmethodyocytesafter14,21,28dofadditionalculturerespectively.RESULTS:ThemorphologyofMSCsinducedfor14dyoc
3、ytesunderaphasecontrastmicroscope.CardiactroponinI,desminandcardiacβmyosinheavychaingenemunocytochemistryandRTPCR.CONCLUSION:Adultadiposetissuecontainsplentyofmesenchymalstemcellsyocytesby5azainvitro.ADMSCsmightbeaneyocardialregeneration.【Keyesenchymalstemcell；
4、adiposetissue；celldifferentiation；cardiomyocytes【摘要】目的：探索成人脂肪組織來源的間充質(zhì)干細胞（ADMSCs）體外分離、培養(yǎng)方法，并化學誘導使其向心肌細胞分化，為心肌再生醫(yī)學提供理想的種子細胞來源.方法：體外分離成人ADMSCs并進行傳代培養(yǎng)，5氮胞苷（5aza）誘導其向心肌細胞分化.分別于誘導后14，21，28d時用免疫細胞化學染色、RTPCR法進行心肌細胞鑒定.結(jié)果：ADMSCs經(jīng)5aza誘導后14d時細胞形態(tài)趨向于心肌細胞，誘導28d免疫細胞化學顯示心肌特異性肌
5、鈣蛋白I（cTNI）、結(jié)蛋白（Desmin）表達陽性，RTPCR檢測心肌β肌球蛋白重鏈（CardiacβMHC）基因表達陽性.結(jié)論：成人脂肪組織存在豐富的間充質(zhì)干細胞且易于分離擴增，體外5aza誘導可使其向心肌細胞分化，可做為心肌再生醫(yī)學的理想種子細胞.【關(guān)鍵詞】間充質(zhì)干細胞；脂肪組織；細胞分化；心肌細胞0引言近年有關(guān)干細胞移植技術(shù)的研究進展對臨床治療心肌終末期疾病帶來了前所未有的希望.國外已有動物實驗及小規(guī)模臨床試驗顯示自體骨髓間充質(zhì)干細胞（bonemarroesenchymalstemcells，BMMSCs）移
6、植入壞死心肌后可改善心功能［1-2］.但由于BMMSCs來源有限，其廣泛臨床應(yīng)用受到限制.新近研究發(fā)現(xiàn)，同樣來源于中胚層的脂肪組織中亦含有一種多向分化潛能干細胞，這種細胞群更易分離，細胞數(shù)量多，可以發(fā)揮替代BMMSCs的作用［3-6］.本實驗我們通過體外分離脂肪組織源性間充質(zhì)干細胞(adiposederivedmesenchymalstemcells，ADMSCs)并傳代擴增，在體外特定條件下定向誘導，探討其向心肌細胞分化的潛能.1材料和方法1．1材料新鮮脂肪組織（取自蘭州軍區(qū)總醫(yī)院微創(chuàng)外科中心單純性闌尾炎患者大網(wǎng)膜
7、，男性，18歲），高糖DMEM培養(yǎng)基（Sigma），胰蛋白酶（Ameresco），Ⅰ型膠原酶（Sigma），優(yōu)質(zhì)胎牛血清（Gibco），5氮胞苷（5azacytidine，5aza，Sigma生物），鼠抗人心肌特異性肌鈣蛋白I（CardiacTroponinI，cTNI，美國QED生物）及DesminmAb（Sigma），F(xiàn)ITC標記羊抗鼠二抗（博士德），總RNA抽提試劑盒（上海生工），RTPCR試劑盒（Fermentars）.1．2方法1.2.1原代細胞分離培養(yǎng)外科手術(shù)室無菌條件下取大網(wǎng)膜脂肪組織約100mg，去除
8、包膜及血管組織，PBS(含2×105U/L青霉素和200mg/L鏈霉素)沖洗3次以洗去紅細胞的污染，眼科剪剪碎至1mm×1mm×1mm大小，加2.5g/L胰蛋白酶5mL,0.75g/LⅠ型膠原酶5mL，37℃恒溫水浴箱振蕩消化60min，棄上層脂肪及上清，加含150mL/LFBS的DMEM培養(yǎng)基10mL吹打成混懸液終止消化，3000r/min離
