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《成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)觀察論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)觀察論文張衛(wèi)澤，陳躍武，哈小琴，陳永清，秦勉，馬凌，郭建巍，洪志斌【關(guān)鍵詞】成人脂肪【Abstract】AIM:Toexplorethemethodsofisolatingandculturingmesenchymalstemcellsfromadultadiposetissue（ADMSCs）andinducingthemtodifferentiateintocardiomyocytesinvitro,soastoestablishaneyoc
2、ardialregeneration.METHODS:MSCsadultadiposetissue.5azacytidine(5aza)inducedthosecellstodifferentiateintocardiomyocytes.ThentheimmunocytochemicalmethodandtheRTPCRmethodyocytesafter14,21,28dofadditionalculturerespectively.RESULTS:ThemorphologyofMSCsinduc
3、edfor14dyocytesunderaphasecontrastmicroscope.CardiactroponinI,desminandcardiacβmyosinheavychaingenemunocytochemistryandRTPCR.CONCLUSION:Adultadiposetissuecontainsplentyofmesenchymalstemcellsyocytesby5azainvitro.ADMSCsmightbeaneyocardialregeneration.【Ke
4、yesenchymalstemcell；adiposetissue；celldifferentiation；cardiomyocytes【摘要】目的：探索成人脂肪組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（ADMSCs）體外分離、培養(yǎng)方法.freelin）表達(dá)陽(yáng)性，RTPCR檢測(cè)心肌β肌球蛋白重鏈（CardiacβMHC）基因表達(dá)陽(yáng)性.結(jié)論：成人脂肪組織存在豐富的間充質(zhì)干細(xì)胞且易于分離擴(kuò)增，體外5aza誘導(dǎo)可使其向心肌細(xì)胞分化，可做為心肌再生醫(yī)學(xué)的理想種子細(xì)胞.【關(guān)鍵詞】間充質(zhì)干細(xì)胞；脂肪組織；細(xì)胞分化；心肌細(xì)胞0引言
5、近年有關(guān)干細(xì)胞移植技術(shù)的研究進(jìn)展對(duì)臨床治療心肌終末期疾病帶來(lái)了前所未有的希望.國(guó)外已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及小規(guī)模臨床試驗(yàn)顯示自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bonemarroesenchymalstemcells，BMMSCs）移植入壞死心肌后可改善心功能［1-2］.但由于BMMSCs來(lái)源有限，其廣泛臨床應(yīng)用受到限制.新近研究發(fā)現(xiàn)，同樣來(lái)源于中胚層的脂肪組織中亦含有一種多向分化潛能干細(xì)胞，這種細(xì)胞群更易分離，細(xì)胞數(shù)量多，可以發(fā)揮替代BMMSCs的作用［3-6］.本實(shí)驗(yàn)我們通過(guò)體外分離脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞(adipo
6、sederivedmesenchymalstemcells，ADMSCs)并傳代擴(kuò)增，在體外特定條件下定向誘導(dǎo)，探討其向心肌細(xì)胞分化的潛能.1材料和方法1．1材料新鮮脂肪組織（取自蘭州軍區(qū)總醫(yī)院微創(chuàng)外科中心單純性闌尾炎患者大網(wǎng)膜，男性，18歲），高糖DMEM培養(yǎng)基（Sigma），胰蛋白酶（Ameresco），Ⅰ型膠原酶（Sigma），優(yōu)質(zhì)胎牛血清（Gibco），5氮胞苷（5azacytidine，5aza，Sigma生物），鼠抗人心肌特異性肌鈣蛋白I（CardiacTroponinI，cTNI，美國(guó)
7、QED生物）及DesminmAb（Sigma），F(xiàn)ITC標(biāo)記羊抗鼠二抗（博士德），總RNA抽提試劑盒（上海生工），RTPCR試劑盒（Fermentars）.1．2方法1.2.1原代細(xì)胞分離培養(yǎng)外科手術(shù)室無(wú)菌條件下取大網(wǎng)膜脂肪組織約100mg，去除包膜及血管組織，PBS(含2×105U/L青霉素和200mg/L鏈霉素)沖洗3次以洗去紅細(xì)胞的污染，眼科剪剪碎至1mm×1mm×1mm大小，加2.5g/L胰蛋白酶5mL,0.75g/LⅠ型膠原酶5mL，37℃恒溫水浴箱振蕩消化60min，棄上層脂肪及上清，加
8、含150mL/LFBS的DMEM培養(yǎng)基10mL吹打成混懸液終止消化，3000r/min離心10min，棄上清，最底層細(xì)胞層用雙抗PBS洗3遍，DMEM培養(yǎng)基吹打混懸，400目細(xì)胞篩過(guò)濾收集細(xì)胞并移至25cm×25cm塑料培養(yǎng)瓶中，加完全培養(yǎng)液（150mL/LFBS,100×雙抗的LGDMEM培養(yǎng)基）37℃,50mL/LCO2培養(yǎng)箱飽和濕度培養(yǎng).24h后首次換液，去除懸浮細(xì)胞.此后每3日換液1次，12濃度的單細(xì)胞懸液，重新接種于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng).24h后換液去除未貼壁細(xì)胞，
