淺析超聲波法乙醇提取山楂葉黃酮

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1、淺析超聲波法乙醇提取山楂葉黃酮文章標(biāo)題：淺析超聲波法乙醇提取山楂葉黃酮摘要：楂葉中有效成分黃酮的提取，目前廣泛使用的乙醇提取法存在提取溫度高、時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)，本文研究在超聲波條件下，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)考察了乙醇浸提山楂葉中黃酮的提取工藝條件。關(guān)鍵詞:超聲波；乙醇；山楂葉；黃酮簡(jiǎn)介：鄧光輝（1957-）,男，教授，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。基金項(xiàng)目：廣西省科學(xué)基金項(xiàng)目(桂科基:0236037)，廣西教育廳項(xiàng)目(桂教科研[2002]316號(hào))資助黃酮類(lèi)成分有降壓、降血脂、增加冠脈流量、強(qiáng)心、抗心律不齊等藥理作用。山楂果肉及山楂葉中含有豐富

2、的黃酮類(lèi)化合物，由于其對(duì)心腦血管疾病有顯著療效而被受人們的關(guān)注。山楂葉中有效成分黃酮的提取，目前廣泛使用的乙醇提取法，是采用索氏提取器回流提取。但此方法存在提取溫度較高、提取時(shí)間長(zhǎng)、乙醇消耗大、成本高等缺點(diǎn)。超聲技術(shù)應(yīng)用于提取山楂葉中黃酮的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究在超聲波條件下，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)考察了乙醇浸提山楂葉中黃酮的提取工藝條件。1實(shí)驗(yàn)部分1.1材料試劑與儀器KQ-32000DB型數(shù)控超聲波儀（昆山超聲儀器有限公司）；916型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（澳大利亞GBC公司），離心沉淀器，分析天平（上海第三分析儀器廠），循環(huán)水式多用真

3、空泵。山楂葉：采自廣西靖西。蕓香葉苷：即蘆?。ㄖ袊?guó)生物制品鑒定所）。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制蘆丁的測(cè)定采用亞硝酸鈉-硝酸鋁分光光度法。精密稱取蘆丁42.5mg，用60的乙醇溶解并稀釋至250ｍL，作為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。精密量取1、2、3、4、5、6mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，分別置25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5亞硝酸鈉溶液1mL，混勻，放置6min；加10硝酸鋁溶液1mL，混勻，放置6ｍin；加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min；以試劑空白作參比，用1cｍ比色皿在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。所得數(shù)據(jù)經(jīng)

4、回歸處理，回歸方程為ｙ=0.0885A0.0013，ｒ=0.9998。蘆丁濃度在0.02-1.212mg/ml范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。1.2.2山楂葉中總黃酮含量測(cè)定將剪碎的山楂葉2.0g置于索氏提取器中，加入100mL60乙醇液索氏回流提取3h，將提取液過(guò)濾，殘?jiān)?0乙醇液洗滌3次，合并濾液，定容于250mL，放置2h后，離心沉淀20min。取上層清液1mL按亞硝酸鈉-硝酸鋁分光光度法測(cè)定吸光度，計(jì)算山楂葉中總黃酮含量為4.10。1.2.3超聲波乙醇提取山楂葉中黃酮的方法稱取2.0g剪碎的山楂葉于100mL圓底燒瓶中，按一定的

5、料液比加入乙醇提取劑，在攪拌條件下，將圓底燒瓶置于超聲波儀中用超聲波處理一定時(shí)間后過(guò)濾，殘?jiān)孟鄳?yīng)的提取劑洗滌3次，合并濾液，定容于250mL，放置2h后，離心沉淀20min，取上層清液1mL亞硝酸鈉-硝酸鋁分光光度法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮提取率。2結(jié)果與討論2.1乙醇濃度對(duì)黃酮提取率的影響在常溫下，料液比1/25，不同乙醇濃度的條件下，進(jìn)行超聲波處理20min，結(jié)果見(jiàn)圖1。從圖1可知，乙醇濃度在50~70時(shí)，有較高的提取率。乙醇濃度大于70以后，黃酮提取率大幅度降低。較高乙醇濃度有利于提高黃酮提取率，但高濃度乙醇使其他醇溶性雜質(zhì)

6、的溶出增多，有效成分溶出減少。2.2超聲波處理時(shí)間對(duì)黃酮提取率的影響在常溫下，乙醇濃度60，料液比1/25，攪拌條件下做不同超聲波處理時(shí)間對(duì)黃酮提取率的影響實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖2，提取時(shí)間在15至45min之間提取率隨時(shí)間的延長(zhǎng)而提高，45min后基本達(dá)到平衡。2.3最佳提取條件的確定為了獲得以乙醇作為提取劑時(shí)，超聲提取山楂葉中黃酮的最佳工藝條件，利用正交法“均衡分散”的特點(diǎn)，以不同的乙醇濃度，不同的處理時(shí)間，不同的料液比為主要考察因素，以浸取樣品中總黃酮的提取率為主要考察指標(biāo)，確定最佳提取條件。表1正交因子水平表因子乙醇濃度/時(shí)間/m

7、in料液比（W/V）水平ABC150451/25260301/20370151/30按表1的正交因子水平設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表2。表2正交實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果因子ABC提取率/水平111388.18212185.29313268.96421287.22522370.25623165.92731166.41832258.12933357.85k1242.43241.81217.62k2223.39213.66214.30k3182.38192.73217.44R60.0549.083.30從12全文查看表C，乙醇

8、濃度對(duì)提取率影響最大，其次是超聲波提取時(shí)間，料液比的影響最小。對(duì)于A因素有K1K2K3，對(duì)于B因素有K1K2K3，對(duì)于C因素有K1K3K2，由此可確定最佳條件為A1B1C1，即乙醇濃度50，超聲波作用時(shí)間45min，料液比為1/25。再按A1B1C