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《染料木黃酮與順鉑聯(lián)用對耐藥卵巢癌細胞skov論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、染料木黃酮與順鉑聯(lián)用對耐藥卵巢癌細胞SKOV論文袁鵬，黃艷紅，辛曉燕，宋暉，田爽，王德堂【關(guān)鍵詞】染料binedacellSKOV3【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofgenisteinbinedacellSKOV3.METHODS:ThegroorphologicalalterationsofSKOV3cellsonstratedbyHoechst33342stainingunderafluorescencemicroscopeandapoptosisandcellcycled
2、istributionetry.RESULTS:Variousconcentrationsofgenisteininbination0.586to0.869,provethegroayberelatedtotheG2/MarrestandthedisturbanceofSphasebygenistein.【Keys;drugsynergism【摘要】目的：探討染料木黃酮與順鉑聯(lián)用對耐藥卵巢癌細胞系SKOV3增殖與凋亡的影響.方法：采用MTT比色法檢測染料木黃酮和順鉑聯(lián)用對SKOV3細胞增殖的影響，Hoechst染色熒光顯
3、微鏡下觀察聯(lián)合用藥后細胞形態(tài)的改變，流式細胞儀分析細胞周期并檢測凋亡率.結(jié)果：聯(lián)用不同濃度的染料木黃酮后順鉑對SKOV3細胞IC50降低率為32.3%~79.8%,兩藥聯(lián)合作用系數(shù)在0.586~0.869之間.freela公司)；四甲基偶氮唑藍(MTT)(Amresco公司).細胞周期檢測試劑盒為DNAPrepStainkit(BeckmanCoulter公司)；K3型全自動酶標儀(LabsystemsDragon公司)；ELITEESP型流式細胞儀（BeckmanCoulter公司）.1.2方法1.2.1MTT法檢測細
4、胞增殖抑制率取對數(shù)生長期的SKOV3細胞，8×103個/孔接種于96孔培養(yǎng)板，置37℃，50mL/LCO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h，細胞貼壁后棄去培養(yǎng)液，然后加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基200μL：對照組只加RPMI1640培養(yǎng)基(100mL/L小牛血清)；順鉑組加入順鉑濃度分別為0.625，1.25，2.5，5，10，20mg/L的培養(yǎng)基；染料木黃酮組加入染料木黃酮濃度分別為2.5，5，10，20，30，40，50mg/L的培養(yǎng)基；染料木黃酮和順鉑聯(lián)用組為2.5，5，10，20mg/L的染料木黃酮與順鉑聯(lián)用，順鉑濃度同單藥組，每
5、組均設(shè)6個復孔.繼續(xù)培養(yǎng)至加藥后96h，每孔加入MTT(5g/L,20μL),繼續(xù)孵育4h后棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO150μL，振蕩10min，用酶標儀檢測各孔吸光值(A490nm)，按以下公式計算：細胞增殖抑制率=（對照組A490nm-實驗組A490nm）/對照組A490nm×100%，取6復孔均值繪制抑制率與藥物劑量關(guān)系曲線，按作圖法求出半數(shù)抑制濃度（IC50）.同時采用聯(lián)合作用指數(shù)(binedindex，CI)判斷染料木黃酮和順鉑聯(lián)用的性質(zhì).CI=DA／ICX,A+DB／ICX,B(A，B代表兩種不同藥物，ICX
6、,A和ICX,.freelg/L），染料木黃酮（10mg/L）和染料木黃酮（10mg/L）+順鉑（2.5mg/L）.繼續(xù)培養(yǎng)36h，固定后加入0.5mLHoechst33342（10mg/L），染色15min后棄染液清洗，抗熒光淬滅液封片，紫外光激發(fā)，在熒光顯微鏡下觀察.1.2.3流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡的變化收集SKOV3細胞，調(diào)整細胞密度為5×107/L，以每瓶8mL接種于75mL培養(yǎng)瓶，細胞貼壁后棄去培養(yǎng)液，加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基.根據(jù)MTT結(jié)果，順鉑濃度選2.5mg/L,染料木黃酮濃度選5和10mg/L，
7、設(shè)對照、單藥和聯(lián)用共6組.加藥36h后收集細胞，分別按DNAPrepStainKit試劑盒和ApoptosisDetectionKit試劑盒說明書進行細胞固定、染色，上流式細胞儀分析.統(tǒng)計學處理：SPSS11.0軟件進行秩相關(guān)分析.2結(jié)果2.1染料木黃酮與順鉑聯(lián)用對SKOV3細胞增殖的影響染料木黃酮、順鉑單藥的IC50分別為30.0mg/L和9.9mg/L，4種不同濃度的染料木黃酮與順鉑聯(lián)用后順鉑的IC50明顯降低，與單用順鉑組比較，4種不同濃度的染料木黃酮可使順鉑的IC50分別降低到6.7，4.2，2.5和2.0mg/
8、L（圖1）.當達到半數(shù)抑制時，不同濃度組合的染料木黃酮與順鉑的CI分別為0.760，0.591，0.586，0.869.其中10和5mg/L染料木黃酮與順鉑聯(lián)用達到高度協(xié)同作用；20.0mg/L和2.5mg/L染料木黃酮與順鉑聯(lián)用分別達到低、中度協(xié)同作用.2.2染料木黃酮與順鉑聯(lián)用后SKOV3細胞形態(tài)的改變對照組細胞
