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1、雌激素對(duì)穹隆海馬傘切斷大鼠腦內(nèi)nAchR的干預(yù)作用作者:張延霞,郭宗君,崔瑞耀,駱剛【摘要】目的以雙側(cè)穹隆海馬傘切斷制作阿爾茨海默?。ˋD)大鼠模型,觀察腦內(nèi)海馬CA1區(qū)和皮層區(qū)煙堿型乙酰膽堿受體(nAchR)表達(dá)的變化,探討與AD相關(guān)的發(fā)病機(jī)制,并觀察雌激素的干預(yù)作用。方法健康雌性ethodsHealthyfemalebria/fornixtransectiongroup,(2)estrogentreatmentgroup,and(3)controlgroup.Therebria/fornixodelsade.Immunoreactivecellsmunohistochemicalmuno
2、reactivecellscouldbeobservedinhippocampusCA1andcortex.ResultsInfimbria/fornixtransectiongroup,theexpressionofnAchRobviouslydecreasedintheobservedareasofthebrain(P<0.05).Inestrogentreatmentgroup,theexpressionofnAchRincreasedremarkably(P<0.01).ConclusionThecellsexpressingnAchRclearlydecreaseinth
3、eareasofCA1andcortexofratsbria/fornixistransected,butthecellnumberincreasessignificanlyifectogenicestrogenisadded.ThechangeinnAchRiscloselyrelativebriafornix;transection;nicotinicacetylcholinereceptor;estrogen;Alzhelmer'sdisease阿爾茨海默?。ˋlzheimer'sDisease,AD)是一種以認(rèn)知記憶障礙為主要特征的進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病。其特征性病理改變?yōu)槔夏臧?,神?jīng)元
4、纖維纏結(jié)及神經(jīng)元丟失以及多種神經(jīng)遞質(zhì)和受體的改變。AD是神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行性退行性疾病,其病因可能是多源性的,其中,乙酰膽堿受體與AD發(fā)病有密切的關(guān)系[1]。研究表明,雌激素與AD有密切關(guān)系[2]。本實(shí)驗(yàn)利用穹隆海馬傘切斷的方法模擬制作AD大鼠模型,觀察AD發(fā)生時(shí)和給予外源性雌激素(E2)時(shí),大鼠腦內(nèi)海馬CA1區(qū)和皮層區(qū)煙堿型乙酰膽堿受體nAchR表達(dá)的改變,進(jìn)一步研究E2與nAchR的關(guān)系以及作用機(jī)制,從而為臨床E2治療AD提供理論基礎(chǔ)。 1材料和方法 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組 健康雌性g/kg,ip)麻醉后,將大鼠固定于江灣IC型腦立體定位儀,按常規(guī)消毒、剪毛、正中切開頭皮,暴露出顱骨,參照
5、Paxinos和m,中線外1mm處,用電動(dòng)開顱器鑿開顱骨,切開硬腦膜,用自制雙刃刀先置于上述部位的腦表面,接著降刀4.5mm,外移1mm,然后再降刀1mm,外移1.5mm,最后上下抽動(dòng)刀約20次,以保證海馬傘外側(cè)緣完全切斷。清潔顱面,縫合頭皮,常規(guī)飼養(yǎng)[5,6]?! ?22動(dòng)物灌注、固定、取材 模型大鼠經(jīng)10%的水合氯醛腹腔麻醉,開胸,心臟灌洗,生理鹽水250ml,快速?zèng)_洗2min,沖凈血液后,4%的多聚甲醛灌注固定5~10min后,斷頭取腦,鋸開顱蓋骨,剪開硬腦膜,切下組織塊放入4%的多聚甲醛后固定30~40min,常規(guī)脫水,二甲苯透明,石蠟包埋?! ?23免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)(S
6、ABC法) 切片入nAchR抗體(1:200,博士德公司)孵育4℃過(guò)夜,或37℃孵育1h,入生物素化兔二抗(中山公司)孵育2h,入ABC復(fù)合物(中山公司)孵育2h,上述每步之間均經(jīng)0.01mol/LPBS溶液漂洗3次,每次10min。DAB呈色,脫水透明、封片,光鏡觀察。陰性對(duì)照:用0.01mol/LPBS代替一抗,其余步驟相同。免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù):nAchR陽(yáng)性細(xì)胞為胞漿內(nèi)呈棕黃色顆粒,與背景對(duì)比度明顯。在顯微鏡下,記錄陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量,并拍照?! ?.3雌激素補(bǔ)充療法[7] 雌激素治療組模型制作方法同穹隆海馬傘切斷組,其后應(yīng)用雌二醇E2(1mg/kg),每7d給予皮下注射1次,共30d
7、。觀察補(bǔ)充外源性雌激素對(duì)nAchR的干預(yù)作用。 1.4實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與統(tǒng)計(jì)處理 在高倍鏡下(400倍),海馬CA1區(qū)和皮層區(qū)隨機(jī)各取5個(gè)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞,平均計(jì)算單個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù),用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。各組數(shù)據(jù)間比較用計(jì)算機(jī)SPSS11.0軟件做統(tǒng)計(jì)分析,然后兩組數(shù)據(jù)間比較用t檢驗(yàn),P<0.05為差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2結(jié)果 對(duì)照組大鼠腦內(nèi)海馬CA1區(qū)、皮層區(qū)nAchR有基礎(chǔ)水平的