大孔吸附樹脂分離純化草珊瑚總黃酮的工藝研究

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1、大孔吸附樹脂分離純化草珊瑚總黃酮的工藝研究【摘要】目的研究大孔吸附樹脂分離純化草珊瑚總黃酮工藝，為草珊瑚總黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法以貴州產(chǎn)草珊瑚為原料，以草珊瑚總黃酮含量及回收率等為考察指標(biāo)，選用大孔吸附樹脂對草珊瑚總黃酮進(jìn)行分離純化，分別采用靜態(tài)試驗(yàn)、動(dòng)態(tài)試驗(yàn)等考察大孔樹脂對草珊瑚總黃酮的分離純化效果及影響因素。結(jié)果AB-8型大孔吸附樹脂對草珊瑚總黃酮靜態(tài)飽和吸附量為116.25mg·g-1（干樹脂），洗脫率92.9%，動(dòng)態(tài)飽和吸附量為94.5mg·g-1（干樹脂），總黃酮回收率在96.1%、純度在9

2、0%以上，是實(shí)驗(yàn)樹脂中分離純化草珊瑚總黃酮的最佳大孔吸附樹脂。結(jié)論分離純化草珊瑚總黃酮最佳工藝條件為：AB-8型大孔吸附樹脂，洗脫劑為70%乙醇，洗脫劑用量為3倍樹脂體積，流速3～4ml/min，上柱總黃酮量與樹脂比為1∶10.5，上柱液總黃酮濃度為19.8mg/ml，流速2～3ml/min，沖洗雜質(zhì)用水體積2～3BV，上柱液pH值4～5。【關(guān)鍵詞】大孔樹脂草珊瑚總黃酮分離純化　　Abstract:ObjectiveAmethodforseparationandpurificationoftheflavonoid

3、sfromSarcandraeglabraacroporousresing·g-1,thestaticelutionratioicabsorptioncapacityofAB-8typeresing·g-1,therecoveryrateorethan96.1%andthepurityorethan90%.AB-8typeresinumconditionsis:AB-8typemacroporousresin,theeluantis70%alcoholand3timesasthevolumeoftheresin,

4、thevolumeoftheresinis10.5timesofflavonoidsinsample,concentrationofflavonoidsofsampleis19.8mg·ml-1andcurrentvelocityof2～3ml·min-1,pHvalueofsampleis4～5.　　Keya公司產(chǎn)品、含量大于98%；大孔吸附樹脂：D3520型，AB-8型，NKA-9型，D4020型，S-8型（南開大學(xué)化工廠）。TU-1800紫外可見分光光度計(jì)（北京普析），RE－52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮），不銹

5、鋼提取鍋（武漢立中），PHSJ－3F精密酸度計(jì)（上海雷磁），ALG5/10自動(dòng)灌裝封口機(jī)（上海國彩），電子天平（美國奧豪斯），恒溫水浴箱(上海醫(yī)療器械廠)；鼓風(fēng)干燥箱(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠)；植株樣本粉碎機(jī)(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠)；液體自動(dòng)混合機(jī)（北京長安儀器廠）?！　?方法與結(jié)果　　2.1草珊瑚總黃酮的測定方法　　草珊瑚總黃酮的測定方法采用蘆丁比色法［5］，測定波長500nm，回歸方程：C=84.317A-0.77361，(r=0.9998)，吸光度線性范圍：0.1～0.6，加樣回收的平均回收率99.37%，RSD=1.8

6、5%（n=6）；精密度測定RSD=0.95%。　　2.2草珊瑚總黃酮純化用樣品液的制備取草珊瑚全草（除根）干品粗粉500g，根據(jù)作者已有試驗(yàn)L9（34）正交設(shè)計(jì)篩選出的草珊瑚總黃酮乙醇浸提最優(yōu)水平組合工藝：即采用60%乙醇、80℃溫度，3h/次，提取3次進(jìn)行提取制備，制得草珊瑚總黃酮提取液（總黃酮含量：9.5mg·ml-1）冷藏備用。　　2.3大孔吸附樹脂的篩選［6～8］將D3520型、AB-8型、NKA-9型、D4020型、S-8型樹脂先用4倍體積量95%乙醇或丙酮浸洗均可，至浸洗液加適量蒸餾水無白色渾濁現(xiàn)象時(shí)

7、止，用水反復(fù)清洗干凈至無醇味或無酮味，加入4倍體積量2mol·L-1的氫氧化鈉溶液，浸泡12h，以水洗至中性；再加入4倍體積量4mol·L-1的鹽酸，浸泡12h，用蒸餾水洗至中性后60℃烘干備用。精密稱取經(jīng)上述預(yù)處理的干樹脂1g共3份，置100ml三角瓶中，精密加入2.2項(xiàng)下制取的樣品液20ml后震蕩吸附，頻率120次/min，1分鐘間隔振蕩2h，然后靜置20h，使其達(dá)到飽和吸附，吸取上層液測定總黃酮濃度，按下式計(jì)算樹脂飽和吸附量：飽和吸附量=［（初始濃度-吸附后濃度）×吸附液體積］/樹脂量（mg·g-1干樹脂）

8、，取三次平均值。將經(jīng)靜態(tài)飽和吸附總黃酮后樹脂濾出，吸干表面水分，精密加入60%濃度的乙醇20ml后同上法震蕩2h后濾出，測定洗脫液總黃酮的濃度，計(jì)算洗脫率：洗脫率=［洗脫液濃度×洗脫液體積］/飽和吸附量×100%，取3次平均值。結(jié)果見表1。表15種樹脂對草珊瑚總黃酮的靜態(tài)飽和吸附洗脫結(jié)果（略）上述結(jié)果表明5種大孔吸附樹脂對草珊瑚總黃酮的靜態(tài)飽和吸附量均在90mg以上，以A