大孔吸附樹脂分離純化雞血藤總黃酮的研究論文

大孔吸附樹脂分離純化雞血藤總黃酮的研究論文

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1、大孔吸附樹脂分離純化雞血藤總黃酮的研究論文王宏何薇曾祖平唐勇【摘要】目的研究不同型號大孔吸附樹脂對雞血藤總黃酮的吸附解吸性能,為分離純化雞血藤總黃酮提供選擇樹脂的依據(jù),選擇最佳提取分離工藝。方法以雞血藤總黃酮含量為指標(biāo),考察4種不同型號大孔樹脂對雞血藤總黃酮的比吸附量和比洗脫量。結(jié)果通過吸附容量和洗脫效果的比較,F(xiàn)L2和DS401型號樹脂對雞血藤總黃酮的吸附容量大,易洗脫。結(jié)論4種不同型號大孔樹脂對雞血藤總黃酮的吸附及解吸性能有很大差異,綜合其比吸附量和比洗脫量。FL2和DS401型號樹脂較適合分離純化雞血藤總黃酮。

2、【關(guān)鍵詞】雞血藤;總黃酮;大孔吸附樹脂雞血藤為傳統(tǒng)中藥,性溫,味苦、甘,歸肝腎經(jīng),有補血活血,通絡(luò)的功效[1].freela公司);葛根素含量測定用(購于中國藥品生物制品鑒定所)。大孔樹脂DS-401;FL-2;D1400(天津市海光化工有限責(zé)任公司);FL-1(天津歐瑞生物科技有限公司)。1.3試劑所用化學(xué)試劑均為分析純95%乙醇(AR)。2方法與結(jié)果2.1大孔吸附樹脂預(yù)處理各型樹脂用95%乙醇浸泡4h后濕法上柱,95%乙醇流動清洗,并不時檢查流出液,至流出乙醇液與水混合(1∶5)不呈白色混濁為止,然后用大量蒸餾水流動清洗

3、,至無醇味備用。2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品5mg80%乙醇溶解,超聲20min,充分溶解后定容至25ml,作為對照品溶液備用。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對照品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml,分別置于7個10ml干凈容量瓶中,80%乙醇定容至10ml,搖勻,紫外分光光度計278nm處單波長測定,以吸收度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程,A=59.125C+0.01086,r=0.9998(線性范圍0.002~0.014mg/ml)。見圖1。圖1大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

4、2.4供試液的制備取雞血藤500g,2500ml80%乙醇浸泡過夜,加熱回流提取3次,2h/次,合并提取液,減壓回收乙醇至無醇味,加入5000ml蒸餾水,稀釋至每毫升含生藥0.1g的溶液,靜至過夜,過濾,濾液作為供試品備用。2.5總黃酮含量測定采用紫外分光光度法,以大豆苷元為標(biāo)準(zhǔn)品,在278nm處測定其吸光度,代入回歸方程換算樣品溶液的濃度,計算總黃酮含量。2.6樹脂的篩選與解析2.6.14種型號大孔吸附樹脂對雞血藤總黃酮的動態(tài)吸附性能考察各型號樹脂比吸附量的測定將預(yù)處理好的4種型號樹脂適量(相當(dāng)于5g干樹脂),分裝到4個1

5、00ml帶塞具塞三角瓶中,精密加入供試液50ml,室溫下振搖吸附12h。在0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12h時吸取上清液,測定樣品中總黃酮含量。按下式計算t小時內(nèi)各樹脂對雞血藤總黃酮的比吸附量,以比吸附量對t作圖,得到各樹脂雞血藤總黃酮吸附動力學(xué)曲線,見圖2。A=(C1吸附前-C2吸附后)×V1樣/=(C洗脫×V樣品)/:比洗脫量(mg/g);C:洗脫液濃度(mg/ml);V:樣品液體積(ml);l3個濃度樣品液,精密量取50ml,加入5gFL-2型干樹脂中靜態(tài)吸附,每小時測定1次溶液中總黃酮的剩余量

6、,計算出其比吸附量,結(jié)果見表1。2.7.2藥液用量對大孔吸附樹脂吸附雞血藤總黃酮的影響分別精密量取生藥濃度1g/ml的藥液20,50,70ml,加入5gFL-2型干樹脂中靜態(tài)吸附,每小時測定一次溶液中總黃酮的剩余量,計算出其比吸附量,結(jié)果見表1。2.7.3洗脫速度對大孔吸附樹脂吸附雞血藤總黃酮的影響分別精密量取3份藥液濃度為1g/ml的樣品液50ml于3個100ml干凈三角瓶中,加入5g干樹脂中,靜態(tài)吸附6h,充分吸附后用70%乙醇洗脫,收集洗脫液,按“2.6.2”項下測定計算洗脫液中雞血藤總黃酮含量,結(jié)果見表1。表1生藥濃

7、度,藥液用量,洗脫速度對大孔樹脂吸附解析的影響3討論應(yīng)用大孔樹脂分離純化雞血藤總黃酮研究數(shù)據(jù)表明,4種樹脂對雞血藤總黃酮的吸附容量有明顯差異,4種樹脂中,F(xiàn)L-1型號樹脂對雞血藤總黃酮的吸附容量最大,D1400的吸附容量最小。DS-401,F(xiàn)L-2,F(xiàn)L-1三種樹脂6h對雞血藤總黃酮的比吸附量均超過12mg/g,表明這3種樹脂對雞血藤總黃酮的吸附能力較強。同時,從圖1還可以看出,這3種樹脂對雞血藤總黃酮吸附速度差異較大,F(xiàn)L-2型樹脂在4h時,率先達(dá)到飽和,DS-401,F(xiàn)L-1在5h時相繼達(dá)到飽和,D140012h也未達(dá)到

8、飽和(以12mg/g為準(zhǔn))。因此,4種樹脂對雞血藤總黃酮的吸附速度順序為:FL-2FL-1DS-401D1400。(注:累積比洗脫量為各低濃度乙醇比洗脫量與本濃度乙醇比洗脫量的累加)圖34種不同型號大孔吸附樹脂累積比洗脫圖由圖2看出,4種樹脂吸附雞血藤總黃酮后,在20%~70%乙醇濃度區(qū)間

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