百草枯致小鼠帕金森病模型多巴胺能神經(jīng)元損害作用的研究論文

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1、百草枯致小鼠帕金森病模型多巴胺能神經(jīng)元損害作用的研究論文.freelg/kg經(jīng)腹腔注射PQ，分別觀察動(dòng)物行為，高效液相法測定紋狀體部多巴胺（DA）含量的變化。免疫組化染色法觀察和計(jì)數(shù)黑質(zhì)（SN）酪氨酸羥化酶（TH）陽性神經(jīng)元的數(shù)量，免疫組化法觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)MMP2、MMP9的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果與對照組比較，模型組SN致密部TH陽性神經(jīng)元數(shù)明顯減少（P＜0.01），紋狀體DA含量明顯低于對照組（P＜0.01），MMP2、MMP9的表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論大劑量的PQ可使小鼠產(chǎn)生類似于PD的行為和DA能神經(jīng)元的損害，MMP2、MMP9可能參與了DA能神經(jīng)元的損害過程?！娟P(guān)鍵詞

2、】百草枯；帕金森??；多巴胺能神經(jīng)元【Abstract】ObjectiveToinvestigatebiologicaleffectofparaquat(PQ),environmentalfactor,ondopaminergicneuronsofsubstantianigra(SN).freelatrixmetalloproteinases(MMP)inthepathogenesis.MethodsTheC57BLmiceg/kgPQ,andHPLCine(DA)instriatum.Immunohistochemistryassayeasuretheimmunoreact

3、ivityoftyrosinehydroxylase(TH)inSN.ResultsparedountofTHpositiveneuroninMPTPgroupightinjurydopaminergicneuronsofsubstantianigra,MMP2andMMP9mightattendthepathogenesisinC57BLmice.【Keyinergicneurons帕金森病(PD)確切病因尚不清楚。近年來隨著環(huán)境毒素與PD之間的關(guān)系日益受到重視，PD已被認(rèn)為是一種環(huán)境密切相關(guān)疾病。百草枯(PQ)低劑量腹腔注射可引起成年小鼠黑質(zhì)(SN)部多巴胺(DA)

4、能神經(jīng)元減少和產(chǎn)生明顯的行為和神經(jīng)功能障礙〔1，2〕。是模擬環(huán)境毒素暴露誘發(fā)PD的理想動(dòng)物模型?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)在正常腦內(nèi)少有表達(dá)，腦損傷發(fā)生后，血管內(nèi)皮細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和浸潤的中性粒細(xì)胞都可以表達(dá)大量的MMP2和MMP9，與腦微血管通透性、血腦屏障(BBB)通透性、BBB崩潰、炎細(xì)胞浸潤、腦水腫及加重缺血性腦損傷明顯相關(guān)。本文采用腹腔注射PQ的小鼠作為模型，研究環(huán)境毒素暴露誘發(fā)PD過程中DA能神經(jīng)元的損害和MMP2、MMP9的表達(dá)規(guī)律。1材料與方法1.1造?！?〕健康雄性C57BL小鼠16只，鼠齡8g/kg經(jīng)腹腔注射PQ(美國Sig

5、ma公司)，連續(xù)3d；對照組注射相同體積的生理鹽水。觀察小鼠的行為學(xué)改變。1.2標(biāo)本采集在實(shí)驗(yàn)觀察第30天，小鼠用1％戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉，迅速開胸經(jīng)左心室至升主動(dòng)脈插管，先以20ml生理鹽水沖洗血液，隨后用4℃含4％多聚甲醛的0.1mol/LPBS(pH7.4)先快后慢灌流固定，取腦置于20％蔗糖(4℃)直至沉底，用冰凍切片機(jī)行冠狀連續(xù)冰凍切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)和HE染色。1.3紋狀體DA的提取和含量的測定〔1〕用10％水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠后，快速斷頭取腦，在預(yù)冷的0.1mol/LPB緩沖液(pH7.4)中剝離出紋狀體，經(jīng)干冰固化稱重后迅速保存在液

6、氮中。測定時(shí)取出標(biāo)本置于勻漿器中，加入1ml預(yù)冷的高氯酸，制成勻漿，于臺(tái)式冷凍離心機(jī)中4℃、14000r/min離心30min，留取上清液，采用高效液相色譜(HPLC)測定DA含量。1.4免疫組織化學(xué)染色SABC免疫組化試劑盒，DAB顯色試劑盒，抗酪氨酸羥化酶(TH)兔多克隆抗體、羊抗MMP2和羊抗MMP9多克隆抗體（均為武漢博士德公司產(chǎn)品）。切片首先在含0.3％TritonX100的PBS中浸泡30min(室溫)后依次加入：①小鼠抗TH單克隆抗體稀釋液，室溫孵育1h；②生物素標(biāo)記的驢抗小鼠IgG，室溫放置1h；③ABC復(fù)合物室溫浸泡1h，然后用DAB呈色。染色的切片

7、經(jīng)漂洗后裱片、晾干、脫水、透明、封片。在顯微鏡100倍視野下計(jì)數(shù)各組切片SN區(qū)TH陽性神經(jīng)元，并照相。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理組間比較采用單因素方差分析及t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1行為學(xué)和病理學(xué)變化連續(xù)腹腔注射PQ3d后，PQ組小鼠均出現(xiàn)不同程度的運(yùn)動(dòng)障礙，動(dòng)作遲緩、震顫、豎毛、豎尾和活動(dòng)減少。病理學(xué)可見腦組織有大量壞死空腔，在海馬組織周圍尤其明顯（圖1）。2.2SN區(qū)DA能神經(jīng)元數(shù)目的變化鏡下觀察可見，TH陽性神經(jīng)元主要見于對照組的SN，數(shù)量較多，胞體較大，呈錐體型或橢圓型，神經(jīng)元軸突明顯。對照組SN區(qū)TH神經(jīng)元數(shù)為（64.7