正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選白疕消軟膏中的藥材提取工藝論文

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1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選白疕消軟膏中的藥材提取工藝論文【摘要】目的優(yōu)選白疕消軟膏中的藥材提取工藝。方法以銀屑病小鼠模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果為指標(biāo),采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法,對(duì)其關(guān)鍵步驟如加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、醇沉?xí)r加醇量等條件進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果煎煮次數(shù)對(duì)小鼠鼠尾鱗片表皮顆粒層生成有顯著性影響(P<0.05)。結(jié)論最佳工藝為加藥材量8倍的水煎煮3次,1.5h/次,濃縮液加等量乙醇使沉淀?!娟P(guān)鍵詞】白疕消軟膏正交實(shí)驗(yàn)銀屑病小鼠模型提取工藝白疕消軟膏為中藥外用制劑,具有清熱解毒、活血化淤、疏風(fēng)通絡(luò)功效,用于白疕血熱、血淤證(尋常性銀屑

2、?。F渲械拇簏S等藥材是通過(guò)銀屑病抗體搭橋角朊/單一核白細(xì)胞粘連實(shí)驗(yàn)篩選出的抗銀屑病中草藥,因在進(jìn)行抗銀屑病中草藥試驗(yàn)篩選時(shí)各實(shí)驗(yàn)藥液的制備均采用的是水提醇沉法.freell/瓶,批號(hào)060113306)。2方法與結(jié)果2.1正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以影響提取的幾個(gè)主要因素如煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、加水量、醇沉?xí)r加醇量為考察因素,每個(gè)因素設(shè)立3個(gè)水平,因素水平安排見(jiàn)表1表1因素水平2.2樣品的制備按5倍處方量稱(chēng)取大黃等藥材,共9份,分別按表2的實(shí)驗(yàn)條件煎煮,過(guò)濾,減壓濃縮至適量,加乙醇使沉淀,過(guò)濾,濾液減壓回收乙醇,調(diào)整全量至每

3、毫升相當(dāng)于生藥2g,即得。表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析2.3銀屑病小鼠模型實(shí)驗(yàn)[1~5]2.3.1動(dòng)物昆明種小鼠66只,♂,體質(zhì)量(27.2±2.7)g,普通級(jí),由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2.3.2方法取昆明種小鼠,常規(guī)飼料喂養(yǎng),隨機(jī)分成11組,每組6只,實(shí)驗(yàn)組用正交設(shè)計(jì)下的9份樣品,陰性對(duì)照組用生理鹽水,陽(yáng)性對(duì)照組用哈西奈德溶液,在每只小鼠尾部均勻涂抹(約0.5ml),2次/d,連續(xù)15d,次日處死小鼠,取距離根部約0.5~1.5cm處尾部皮膚,10%甲醛溶液固定,石蠟包埋,HE染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察每個(gè)小鼠的尾

4、部鱗片(見(jiàn)圖1)。凡兩個(gè)毛囊口之間的鱗片表皮有排列成行的顆粒層者,稱(chēng)為有顆粒層的鱗片,計(jì)數(shù)每100個(gè)鱗片中有顆粒層的鱗片數(shù),對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,并作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果見(jiàn)表3。2.4方差分析將正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果用方差分析。結(jié)果見(jiàn)表4。3討論3.1最佳提取條件的確定正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)直觀分析(見(jiàn)表2)可以看出,對(duì)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的促進(jìn)作用最強(qiáng)提取條件為:A2B3C1D2。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析(見(jiàn)表3)可以看出,對(duì)于小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的促進(jìn)作用,因素B均有顯著性影響(P<0.05),因素A無(wú)顯著性影響。正交實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果極差分析表明,4個(gè)因素對(duì)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的促進(jìn)作用的影響順序均為B>D>C>A。根據(jù)上述正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析,結(jié)合生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),綜合考慮,將最佳提取條件確定為A2B3C1D2,即加藥材的8倍量水煎煮3次,1.5h/次,煎煮液濃縮至適量后加等量乙醇使沉淀。表3對(duì)小鼠鼠尾鱗片表皮顆粒層生成的影響1與陰性對(duì)照組比較,P2與陽(yáng)性對(duì)照組比較;n=6表4方差分析3.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)在表皮層中,角質(zhì)層增厚,其間有排列成層的角化不全細(xì)胞,層與層之間充滿(mǎn)空氣,使鱗屑顯為白色。在靜止期病變,.freelan等利用它作為實(shí)驗(yàn)?zāi)?/p>

6、型,評(píng)價(jià)藥物促進(jìn)顆粒層形成的作用[4],很多學(xué)者在實(shí)驗(yàn)中證明治療銀屑病臨床有效的中藥普遍具有促進(jìn)小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成作用[5]。本實(shí)驗(yàn)中利用這種動(dòng)物模型對(duì)正交實(shí)驗(yàn)的各組藥液對(duì)小鼠尾部鱗片表皮的顆粒層形成作用進(jìn)行評(píng)價(jià),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,促進(jìn)顆粒層的形成作用,與陰性對(duì)照組比較作用較強(qiáng)(除實(shí)驗(yàn)組1,4外,均有顯著性差異,P<0.01),但與陽(yáng)性對(duì)照組比較則作用較弱(除實(shí)驗(yàn)組6,均有顯著性差異,P<0.05或P<0.01)。動(dòng)物表明實(shí)驗(yàn)組6促進(jìn)小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成作用最強(qiáng),其作用與哈西奈德溶液陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)顯著性差異

7、(P>0.05),與生理鹽水陰性對(duì)照組有顯著性差異(P<0.01)?!?/p>

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