反相高效液相色譜梯度洗脫法測定七葉神安膠囊中人參皂苷rb3的含量論文

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1、反相高效液相色譜梯度洗脫法測定七葉神安膠囊中人參皂苷Rb3的含量論文【摘要】目的建立反相高效液相色譜梯度洗脫法測定七葉神安膠囊中人參皂苷Rb3的含量。方法色譜柱為HypersilC18(5μm，4.6mm×200mm)，流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脫：0～14min，19→33；14～16min，33→49，流速為1.0ml/min，檢測波長為203nm，柱溫為30℃。結(jié)果人參皂苷Rb3進樣量在1.7696～10.6176μg（r=0.9999）的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.freelethodfordeterminationofthecontentsofGinsenosideRb3inQi

2、yeShen'ancapsule.MethodsThechromatographicconditionsincludedHypersilC18column（4.6mm×200mm,5μm）andthemobilephaseconsistedofacetonitril-0.2%phosphoricacid:0～14min,19→33；14～16min,33→49.Detection.Theflol/min.Columntemperatureethodissimple,accurate,reproducibleandcanbeusedforthequalitycontrolofQiyeShen'

3、ancapsule.Key，4.6mm×200mm)；以乙腈為流動相A，以0.2%磷酸溶液為流動相B，按表1中的規(guī)定進行梯度洗脫；流速1.0ml/min；檢測波長203nm；柱溫30℃；進樣量10μl。表1流動相梯度洗脫程序（略）2.2供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，研細，精密稱取適量（約相當(dāng)于含三七葉總皂苷100mg），置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250in，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。2.3標準曲線的繪制精密稱取人參皂苷Rb3對照品45mg，置25ml量瓶中，加乙醇

4、溶解并稀釋至刻度，搖勻，從中精密吸取1，2，3，4，5，6ml置10ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μl注人液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積A對進樣量C（μg）進行線性回歸,得回歸方程為：A=25092+199818C，r=0.9999，表明人參皂苷Rb3進樣量在1.7696～10.6176μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。2.4精密度實驗精密吸取人參皂苷Rb3對照品溶液10μl，重復(fù)進樣6次，測定峰面積，結(jié)果RSD為0.31%。2.5穩(wěn)定性實驗取供試品溶液，分別于制備后0，2，4，6，8，12h測定，結(jié)果RSD為0.32%，表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。2.

5、6重復(fù)性實驗取同一批號樣品6份，精密稱定，依法平行測定，結(jié)果人參皂苷Rb3平均含量為13.990mg/粒，RSD為0.88%。2.7加樣回收率實驗取已知含量的樣品6份，精密稱定，分別精密加入人參皂苷Rb3對照品適量，依法測定，計算回收率，結(jié)果見表2。表2加樣回收率實驗結(jié)果（略）2.8陰性干擾實驗取陰性對照樣品按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果在選定的色譜條件下，供試品中人參皂苷Rb3峰與其他組分色譜峰能達到基線分離，陰性對照對測定無干擾。見圖1～3。2.9樣品測定取樣品3批，依法測定含量。結(jié)果見表3。表

6、3樣品測定結(jié)果（略）3討論樣品前處理分別對不同提取溶劑及不同超聲處理時間進行了比較，結(jié)果表明以乙醇為溶劑，超聲處理15min即可基本提取完全。本品雖為單方制劑，但所含成分較復(fù)雜，對分離有一定影響，本實驗曾對甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.5%冰醋酸溶液，乙腈-0.2%磷酸溶液4種流動相系統(tǒng)分別進行篩選優(yōu)化，最后確定以乙腈-0.2%磷酸溶液作為流動相進行梯度洗脫，能使人參皂苷Rb3達到基線分離，且其他成分對測定無干擾。本實驗方法亦可用于三七葉藥材及其復(fù)方制劑的含量測定?！?/p>