丁酸鈉對食管癌細胞增殖的影響論文

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1、丁酸鈉對食管癌細胞增殖的影響論文尹惠卿張嵐賀付成張云漢高冬玲【摘要】目的:觀察丁酸鈉對食管癌EC9706細胞增殖、細胞周期及NDRG1蛋白表達的影響.方法:采用0.5mmol/L丁酸鈉作用于食管癌EC9706細胞,用MTT法檢測處理不同時間時細胞增殖的變化，采用流式細胞儀檢測細胞周期的變化，采用免疫組化方法檢測NDRG1蛋白表達的變化.結(jié)果:①MTT實驗結(jié)果顯示，丁酸鈉作用1～5d時各組吸光度均低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計學處理差異有顯著性意義（P0.05）；丁酸鈉不同作用時間的細胞增殖抑制率分別為：1d組21.2%

2、，3d組23.5%，5d組25.6%，且隨作用時間延長抑制率升高.②細胞周期檢測結(jié)果為（%）:G1期細胞:對照組57.00±1.10.freelicaheidelberg公司），RPMI1640細胞培養(yǎng)基（GibcoBRL公司）,胎牛血清（杭州四季青生物工程公司），羊抗人NDRG1多克隆抗體（SantaCruz生物技術(shù)公司），丫啶橙(Sigma公司)，CO2孵育箱（美國FormaScientific公司），流式細胞儀（德國PartecPAS公司），F(xiàn)ax250酶標儀（英國Stat公司）.1.2方法1.2.

3、1細胞培養(yǎng)將人食管癌EC9706細胞單層貼壁生長于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，種植于含蓋玻片的六孔板及75cm2培養(yǎng)瓶中.37℃,50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔日換液，取對數(shù)生長期細胞進行試驗.1.2.2MTT實驗取對數(shù)生長期的EC9706細胞,調(diào)整細胞密度為7.5×107/L,按每孔0.2mL接種于96孔細胞培養(yǎng)板中.設空白對照組和0.5mmoL/L丁酸鈉實驗組,每組均設10個復孔.實驗終止前4h向細胞液中加入MTT20μL,細胞被染色后以二甲亞砜200μL溶解甲瓚顆粒,于酶標

4、儀上測定A492nm.實驗重復2次.細胞抑制率=［(A對照-A實驗)/A對照］×100%.1.2.3丁酸鈉處理及細胞周期檢測用RPMI1640培養(yǎng)液將丁酸鈉調(diào)終濃度為0.5mmol/L,對照組為不含丁酸鈉的培養(yǎng)液.取丁酸鈉作用1,3,5d的細胞爬片及對照組細胞爬片從六孔板取出后經(jīng)pH7.4的PBS沖洗，800mL/L丙酮固定30min后用中性樹膠黏于載玻片上，4℃保存，用于免疫組化實驗.分別取丁酸鈉作用1,.freelL/L乙醇1.0mL固定細胞用于細胞周期測定.上機前將細胞離心洗滌制成單細胞懸液,加丫啶橙

5、染色,暗室放置,300目尼龍膜過濾,用流式細胞儀檢測細胞周期分布.1.2.4細胞免疫組織化學染色采用SP試劑盒進行免疫組化實驗.按說明書步驟進行操作，DAB顯色，蘇木素復染，光鏡觀察細胞顯色強度.結(jié)果判定：在高倍鏡下觀察免疫組化著色情況，以信號強弱評定NDRG1表達的強弱.統(tǒng)計學處理：采用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學處理，數(shù)據(jù)均采用x±s表示,檢驗水準α=0.05.2結(jié)果2.1MTT檢測不同時間的各組平均吸光度值均低于對照組，其差異有顯著性意義（P0.05，表1）；隨丁酸鈉作用時間延長，其抑制率升高.表1

6、丁酸鈉對人食管癌細胞EC9706的增殖抑制作用確良（略）2.2丁酸鈉對食管癌細胞細胞周期的影響實驗組G1期細胞比例與對照組比較明顯增高,而S,M期細胞比例減少，經(jīng)統(tǒng)計學處理，差異有顯著性意義（P0.01,表2）.表2丁酸鈉對食管癌EC9706細胞周期的影響（略）2.3丁酸鈉對食管癌細胞NDRG1蛋白表達的影響免疫組化染色結(jié)果顯示，在作用1～5d時，細胞胞質(zhì)黃色著色較對照組明顯加深，且隨作用時間延長而增強（圖1）.3討論食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤，食管癌的治療方法除手術(shù)治療、放療等方法外，還有許多新的治

7、療方法，如基因治療、免疫治療、抗血管生成治療、誘導分化治療等［6］.其中誘導分化治療是腫瘤化學治療的一個新領域.誘導分化是指惡性腫瘤在體內(nèi)外分化誘導劑存在下，細胞惡性行為降低，惡性表性發(fā)生改變，形態(tài)學趨于正常，呈現(xiàn)出向良性或趨向良性細胞分化的現(xiàn)象.利用分化誘導劑可使腫瘤細胞部分或全部恢復分化潛能，轉(zhuǎn)變?yōu)檎＜毎驅(qū)е录毎蛲?，從而達到治療腫瘤的目的.我們的結(jié)果表明，丁酸鈉作用1～5d后細胞增殖的抑制率由17.4%增加到23.8%，表明丁酸鈉可抑制食管癌細胞增殖，實驗中增高丁酸鈉濃度至1mmol/L2～3d（

8、結(jié)果未列出），可見培養(yǎng)的細胞死亡顯著增多，說明其抑制率隨丁酸鈉濃度增加而升高；其增殖抑制作用與丁酸鈉使食管癌EC9706細胞細胞周期發(fā)生變化有關(guān)，丁酸鈉可使G1期細胞增加；S期細胞比例、M期細胞比例顯著降低，從而使細胞增殖周期延長，導致細胞增殖減慢.丁酸鈉作用于食管癌EC9706細胞后，NDRG1的蛋白表達水平顯著升高，而升高NDRG1基因表達可抑制結(jié)直腸癌細胞增殖，促進其分化［4-5］，因此丁酸鈉對食管癌細胞的