DZNep對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖、凋亡和遷移的影響.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniVersityforthedegreeofMasterEf．fectof3一Deazaneplanocinonpr01if．eration，apoptosisandmigrationofesophagealsquamouscellcarcinomaByI沁iliW，angsuperVisor：Prof．醫(yī)盈andFangxiaGuanCellBiologyC01legeofLifeScienceMay，2014原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已

2、經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：互湯夠搦R期：≯仲年，月落日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)

3、位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：磷葡嗍柳年歹月冶日摘要DZNep對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖、凋亡和遷移的影響碩士研究生王瑞莉?qū)熅W(wǎng)關(guān)方霞鄭州大學(xué)生物工程系鄭州4500013．deazan印lanocinA(DzNep)是一種組蛋白甲基化酶抑制劑，且已被應(yīng)用于抗腫瘤、抗寄生蟲(chóng)、抗病毒、抗關(guān)節(jié)炎以及免疫抑制活性等藥理作用【l。3J。據(jù)報(bào)道，DZN印可使腫瘤中沉默的抑癌基因再活化，從而抑制腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，為治療腫瘤提供了一個(gè)新型的靶點(diǎn)。另外，研究表明DzNep對(duì)于治療肝癌、乳腺癌、髓母細(xì)胞瘤、

4、急性髓系白血病、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌、心腦血管疾病以及艾滋病等均能起到重要作用【4母】。然而關(guān)于DZNep對(duì)食管鱗癌的作用報(bào)道甚少，因此本論文將對(duì)DZNep在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用進(jìn)行初步研究。食管鱗癌是我國(guó)較常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，其病發(fā)率和病死率位居全國(guó)惡性腫瘤第四位。一般情況下患者確診時(shí)已為中期或者晚期，且容易復(fù)發(fā)，預(yù)后較差【Io’ll】。傳統(tǒng)的食管鱗癌治療方法主要包括外科手術(shù)治療、化療以及放療，然而患者的治愈率以及預(yù)后情況并不樂(lè)觀。由于誘發(fā)腫瘤的相關(guān)基因的變化是經(jīng)過(guò)多階段積累而成，因而在食管鱗癌癌變的不同階段均涉及到多個(gè)癌基因的激活以及抑癌基因的

5、失活。因此，尋找治療食管鱗癌的分子靶向藥物，聯(lián)合其他治療手段從而綜合治療食管鱗癌已迫在眉睫。S．腺苷高半胱氨酸水解酶(S．a(chǎn)denosylhomocysteinehydrolase，SAHH)作為甲基化通路中的重要限速酶，可催化體內(nèi)細(xì)胞S．腺苷高半胱氨酸(S．a(chǎn)denosylhomocysteine，SAH)水解生成腺苷(adenosine，Ado)和高半胱氨酸(homocysteine，Hcy)，該水解反應(yīng)是S．腺苷高半胱氨酸代謝的唯一途徑，且是一種可逆反應(yīng)。腺苷在一系列酶的催化下可生成cAMP，后者作為細(xì)胞內(nèi)的第二信使，可參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)【12】。同時(shí)，高半胱氨

6、酸通過(guò)一系列催化反應(yīng)，生成s-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethioine，SAM)，SAM為體內(nèi)轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)提供甲基，在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下生成S．腺苷高半胱氨酸，從而完成整個(gè)甲基摘要化循環(huán)?？梢?jiàn)，SAHH是生物體內(nèi)轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)的重要調(diào)控者，調(diào)控多種受體分子，例如蛋白、核酸以及一些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子等的甲基化反應(yīng)【13】。EZH2是PRC2家族中的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，主要介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的組蛋白去甲基化，在多種腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)。EZH2通過(guò)催化組蛋白3第27位三甲基化(H3K27me3)修飾而誘導(dǎo)基因沉默[14】，且在調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄調(diào)控和染色質(zhì)狀態(tài)方面也起到一定作用。已有證據(jù)表明

7、，DZN印具有抗腫瘤活性，部分源于通過(guò)降低EzH2基因的表達(dá)和催化活性從而導(dǎo)致PRC2受到抑制。本研究擬通過(guò)一定濃度的DzN印處理食管鱗癌細(xì)胞系Ec9706和Ecal09細(xì)胞，并檢測(cè)DZN印處理后細(xì)胞的細(xì)胞周期、增殖、遷移、凋以及粘附能力的變化，進(jìn)而探討DzNep對(duì)食管鱗癌細(xì)胞的影響。本研究主要分為兩部分，第一部分對(duì)DzN印處理食管鱗癌細(xì)胞的條件進(jìn)行探索和優(yōu)化，第二部分檢測(cè)DZN印處理食管鱗癌細(xì)胞后細(xì)胞周期、增殖、遷移、凋亡以及粘附能力的變化。方法1細(xì)胞培養(yǎng)食管鱗癌細(xì)胞EC9706、Ecal09均為本實(shí)驗(yàn)室保存。兩株細(xì)胞均在含有10％胎牛血清的I沖MI．1640