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《補(bǔ)腎健脾法對(duì)卵巢早衰小鼠抑制素b含量及基因表達(dá)的影響論文》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、補(bǔ)腎健脾法對(duì)卵巢早衰小鼠抑制素B含量及基因表達(dá)的影響論文陳麗霞,張玉珍,徐發(fā)彬,林青梅,談海東,廖慧慧,黃曉利,梁曉云,趙燕【摘要】【目的】觀察補(bǔ)腎健脾法中藥復(fù)方對(duì)卵巢早衰(POF)小鼠抑制素B(INHB)含量及基因表達(dá)的影響。【方法】選用雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、中藥預(yù)防組和中藥治療組。除正常對(duì)照組外,其他3組采用SD大鼠卵巢抗原與弗氏佐劑注射免疫法復(fù)制自身免疫性卵巢功能衰退小鼠模型。中藥預(yù)防組于第1次免疫后開始灌服中藥復(fù)方湯劑,連續(xù)17d,中藥治療組于第3次免疫后開始灌服中藥復(fù)方湯劑,連續(xù)5
2、d,劑量均為20g·kg-1·d-1。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組血清INHB含量,逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)法檢測(cè)各組卵巢組織INHBmRNA表達(dá)水平,并觀察各組小鼠卵巢病理改變。【結(jié)果】模型組小鼠血清INHB含量、卵巢組織INHBmRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著降低(P0.05或P0.01).freelRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著升高(P0.05或P0.01),卵泡數(shù)目略減少,無明顯病理改變;中藥治療組卵巢組織INHBmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.05),而對(duì)血清INHB含量無影響(P0.05),生長(zhǎng)成熟卵泡減少,
3、且卵巢組織出現(xiàn)病理改變。各組小鼠血清INHB含量與卵巢組織INHBmRNA表達(dá)變化呈相似趨勢(shì),且中藥預(yù)防組作用優(yōu)于中藥治療組?!窘Y(jié)論】補(bǔ)腎健脾法中藥復(fù)方治療卵巢早衰的作用與其能增強(qiáng)卵巢組織INHBmRNA表達(dá),升高INHB含量,改善卵巢的儲(chǔ)備功能有關(guān)。【關(guān)鍵詞】卵巢早衰/中藥療法;補(bǔ)腎健脾法;基因表達(dá)調(diào)控;卵巢/病理學(xué);疾病模型,動(dòng)物;大鼠;小鼠Abstract:ObjectiveToprobethemechanismoftheChinesepoundrecipe,icemuneprematureovarianfai
4、lure(POF).MethodsFemaleBALB/cmicely:normalcontrolgroup,modelgroup,treatmentgroupandpreventiongroup.TheautoimmunePOFiceexceptforthenormalcontrolgroup.Treatmentgroupmunization,.freelmunization.ThemiceserumINHBcontentatureovarianfailure,POF)是引起卵巢功能衰退常見的疾病,其發(fā)病率在婦女中
5、占1%~3%,占繼發(fā)性閉經(jīng)的2%~10%[1],是當(dāng)今生殖醫(yī)學(xué)和生殖健康研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。研究認(rèn)為卵巢儲(chǔ)備功能低下的婦女,卵泡顆粒細(xì)胞抑制素的產(chǎn)生減少,不能將卵泡刺激素(FSH)抑制在正常范圍內(nèi),提示卵泡衰老[2]。維持卵泡完整性所需蛋白質(zhì)mRNAs的變化,預(yù)示凋亡過程的開始[3],而閉鎖過程是促進(jìn)或抑制凋亡的關(guān)鍵基因產(chǎn)物有序表達(dá)的結(jié)果[4]。臨床研究表明[5]補(bǔ)腎健脾中藥對(duì)卵巢功能早衰患者具有較好療效。本研究觀察了補(bǔ)腎健脾中藥對(duì)POF小鼠抑制素B(INHB)及其基因表達(dá)的影響,現(xiàn)報(bào)道如下。1材料與方法1.1動(dòng)物健康
6、BALB/c小鼠,雌性,SPF級(jí),8~10周齡,體質(zhì)量18~22g;SD大鼠,雌性,SPF級(jí),體質(zhì)量約250g,均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,大小鼠合格證號(hào):0016889和0016888。1.2主要試劑及儀器弗氏完全佐劑(CFA)和弗氏不完全佐劑(IFA)均為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品,小鼠INHB試劑盒為美國(guó)RapidBioLab公司產(chǎn)品,Model550microplatereader為美國(guó)BioRad公司產(chǎn)品,逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTPCR)試劑、逆轉(zhuǎn)錄酶均為北京索奧公司產(chǎn)品,GDS7600凝膠掃描
7、系統(tǒng)(DF23B)為英國(guó)UVP公司產(chǎn)品,PE9700PCR擴(kuò)增儀為美國(guó)PE公司產(chǎn)品。1.3藥物補(bǔ)腎健脾法中藥復(fù)方由菟絲子、黨參、枸杞子、淮山、仙靈脾、女貞子、杜仲等組成,并制成濃縮液,含生藥1g/L。1.4卵巢抗原的制備收集SD雌性大鼠的卵巢組織,稱質(zhì)量,洗凈,于TrisHCl緩沖液(pH7.6、0.05mmol/L,150mmol/LNaCl,4mmol/L乙二胺四乙酸,2mmol/L檸檬酸,0.1mmol/L苯甲基磺酰氟)中剪碎并研磨成勻漿,低溫下超聲粉碎5min,低溫離心(4000r/min×15min,1
8、0000r/min×5min)取上清,調(diào)整濃度為200mg/mL,置于-20℃保存。1.5自身免疫性卵巢功能衰退小鼠動(dòng)物模型復(fù)制[6]免疫前通過陰道脫落細(xì)胞涂片篩選正常性周期小鼠,每只小鼠兩后腳掌和腹部多點(diǎn)皮下注射:10mg(0.05mL)卵巢抗原加CFA混合乳化液0.1mL。首次免疫間隔1周,以卵巢抗原與IFA等量乳化加強(qiáng)免疫1次,5d后再加