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1、合歡花中槲皮苷的含量測(cè)定作者：王海嶺，王清溪，黃洪勇，李恒芬【摘要】目的在臨床前研究中，建立合歡不同部位中槲皮苷的含量測(cè)定方法。方法DiamonsilC18(4.6mm×250mm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水(冰醋酸調(diào)pH3.2)=55∶45，流速為1.2ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm。結(jié)果槲皮苷在2.485～24.85μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998，n=7)，平均加樣回收率為101.2%，RSD為1.4%。結(jié)論該方法定量簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可用于控制槲皮苷的質(zhì)量?！娟P(guān)鍵詞】合歡;槲皮
2、苷;高效液相色譜法合歡花為豆科植物AlbizziajulibrissinDurazz的干燥花序，性平味苦?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，合歡花具有解郁安神、活血消腫之功效，用于心神不安、憂郁失眠等癥[1～3]。合歡花鎮(zhèn)靜催眠作用的有效成分為槲皮苷(quercitroside)[4]。本文建立了合歡花中槲皮苷的含量測(cè)定方法，以期為臨床前研究中合歡花的質(zhì)量控制提供依據(jù)。 1儀器與材料 美國(guó)Agilent1100高效液相色譜儀;瑞士XT-120A電子分析天平;上海LXJ-II離心沉淀機(jī);中國(guó)上?？茖W(xué)院2X-91旋轉(zhuǎn)蒸
3、發(fā)儀;上海KQ-250TDE臺(tái)式數(shù)控高頻超聲提取儀。 槲皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)111538-200302);槲皮苷樣品(自制，批號(hào)：080616，081018，081214);甲醇為色譜純;其余試劑為分析純;水為超純水?！ ?方法與結(jié)果 2.1色譜條件DiamonsilC18(4.6mm×250mm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水(冰醋酸調(diào)pH3.2)=55∶45，流速為1.2ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm，柱溫30℃，滿標(biāo)進(jìn)樣20μl。 2.2對(duì)照品液的制備稱取經(jīng)五氧化二磷干
4、燥過(guò)夜的槲皮苷對(duì)照品約10mg，精密稱定，流動(dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，定容，精密量取上述溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，流動(dòng)相定容至刻度，即得0.01mg·ml-1的對(duì)照品溶液?！ ?.3供試品液的制備取供試品200mg，精密稱定，加入甲醇100ml超聲提取30min，提取液加壓低溫旋蒸濃縮，濃縮物以流動(dòng)相溶解轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，流動(dòng)相定容至刻度。進(jìn)樣前以0.22μm的兩用微膜濾過(guò)，備用?！ ?.4檢測(cè)波長(zhǎng)的確定以對(duì)照品溶液在紫外全波段掃描，其在256nm，351nm處均有較強(qiáng)吸收。
5、而256nm處吸收峰呈正態(tài)分布且靈敏度較高，故選定256nm為檢測(cè)波長(zhǎng)?！ ?.5專屬性考察在上述色譜條件下，其他雜質(zhì)不干擾主峰的分離和測(cè)定，槲皮苷保留時(shí)間為11.15min。槲皮苷的有效塔板數(shù)為5800，拖尾因子1.02。見(jiàn)圖1?！ ?.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取對(duì)照品液0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml至10ml容量瓶，流動(dòng)相定容至刻度，漩渦震蕩搖勻，取適量于具塞尖底離心管中4000r/min離心10min，分別吸取上清液20μl進(jìn)樣。以質(zhì)量濃度(C)為縱坐標(biāo)
6、，峰面積(A)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程C=0.516×10-5A-0.145，(r=0.9998，n=7)，在2.485～24.85μg·ml-1范圍內(nèi)C與A呈良好的線性關(guān)系?！ 槲皮苷對(duì)照品b含槲皮苷樣品 圖1槲皮苷的RP-HPLC圖 2.7精密度實(shí)驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液1ml，置于10ml容量瓶中，流動(dòng)相定容，按“2.6”項(xiàng)下同法處理，分別于0，15，30，45，60，120min測(cè)定槲皮苷含量，計(jì)算日內(nèi)精密度;測(cè)定1次/d，共6次，計(jì)算日間精密度。結(jié)果日內(nèi)RSD為0.58%;
7、日間RSD為1.56%?！ ?.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密量取6份供試品溶液1ml，置于10ml容量瓶中，流動(dòng)相定容，按“2.6”項(xiàng)下同法處理，測(cè)得含量的RSD為0.85%?！ ?.9回收率實(shí)驗(yàn)以樣品處理原液(33.37μg·ml-1)為對(duì)象，分別精密量取3份2.0ml置3支10ml容量瓶中，各加入槲皮苷對(duì)照品溶液(23.20μg·ml-1)1.0，2.0，3.0ml，定容至刻度，按“2.6”項(xiàng)下同法處理。每個(gè)濃度平行處理3份，測(cè)定槲皮苷總含量。結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.10樣品含量測(cè)定取各樣品約20
8、0mg，按“2.3”項(xiàng)下處理，余按“2.6”項(xiàng)下同法處理。每批樣品平行處理3份。結(jié)果見(jiàn)表2。表2樣品的含量測(cè)定結(jié)果 3討論 以往槲皮苷的含量測(cè)定方法[5～7]普遍存在著樣品前處理復(fù)雜、耗時(shí)、昂貴，流動(dòng)相選擇復(fù)雜，拖尾，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等缺點(diǎn)，遠(yuǎn)不能適應(yīng)槲皮苷的快速準(zhǔn)確分析。而我們采用的RP-HPLC具有分析儀器普及率高、簡(jiǎn)便、價(jià)廉、快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，不僅可以用于在臨床前研究中控制槲皮苷的質(zhì)量，而且適用于含槲皮苷各種制劑產(chǎn)品的定量分析?！?/p>
