資源描述：
《悅肝膠囊對四氯化碳損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、悅肝膠囊對四氯化碳損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用論文蔡英蘭，金政，樸麗花，李相伍，金美善【關(guān)鍵詞】悅肝膠囊；,.freelaryCulturedRatHepatocytesAbstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofYueganCapsuleonCCl4intoxicatedprimaryculturedrathepatocytes.MethodsHepatocytesinjurymodelsountofhepaticglycogenountofhepaticglycogen,andrestraintheactivityofACPase,andcou
2、ldimprovethechangesofrathepatocytesstructure.ConclusionYuegancapsulehasprotectiveeffectsonCCl4inducedinjuryofprimaryculturedrathepatocytes.Keyl）；CCl4：北京化學(xué)試劑廠產(chǎn)品；東寶肝泰片：中國通化東寶藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品；新生小牛血清：杭州四季青生物工程公司產(chǎn)品；RPMI1640培養(yǎng)基：GIBCO公司產(chǎn)品；胰蛋白酶：DIFCO公司產(chǎn)品；膠原酶：SIGMA化學(xué)公司產(chǎn)品。1.3儀器SC35型倒置顯微鏡：日本OLYMPUS產(chǎn)品；VANOX型萬能顯微鏡：日本O
3、LYMPUS產(chǎn)品；S3500N型掃描電鏡：日本HITACHI公司產(chǎn)品；TD2000型圖像分析儀：北京天地百年科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品。2方法2.1原代單層乳鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)方法采用姜玉順等［3］建立的方法培養(yǎng)至3~4d后用于實(shí)驗(yàn)。2.2CCl4誘發(fā)培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷病理模型的制備用RPMI1640培養(yǎng)液配成3，5，7mol/L濃度經(jīng)篩選，選用5mol/L濃度為本實(shí)驗(yàn)可逆性肝細(xì)胞損傷模型。2.3分組培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞3~4d，取生長良好的培養(yǎng)瓶40瓶分為4組。正常對照組每隔3天更換培養(yǎng)基；模型對照組加入5mol/LCCl4；藥物對照組加入5mol/LCCl4+0.24mg/L東寶肝泰；實(shí)驗(yàn)組加入5mol/LCC
4、l4+1.5mg/L悅肝膠囊。作用24h后，模型對照組換接種培養(yǎng)基；藥物對照組換加有0.24mg/L東寶肝泰的培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)組換加有1.5mg/L悅肝膠囊的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。2.4細(xì)胞化學(xué)觀察取生長蓋玻片，顯示SDH、ACPase、G6Pase和糖原。SDH顯示采用亞鐵氰化甲法；ACPase顯示采用Gomori法；G6Pase顯示采用PUS萬能顯微鏡觀察拍片并利用病理顯微分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析（每組隨機(jī)選5張蓋玻片，每張蓋玻片再隨機(jī)選3個視野，測定每個視野顆粒面積百分比）。2.5掃描電鏡觀察取生長良好的培養(yǎng)瓶，棄去培養(yǎng)液，經(jīng)PBS沖洗，4%戊二醛固定4h，然后再沖洗3次，2%鋨酸液固定3h，常規(guī)沖洗
5、、脫水、乙酸異戊酯置換、HCP2臨界點(diǎn)干燥、離子濺射鍍金膜，掃描電鏡觀察。2.6數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。3結(jié)果3.1細(xì)胞化學(xué)觀察SDH：模型對照組SDH反應(yīng)顆粒比正常對照組明顯減少，染色淺；實(shí)驗(yàn)組SDH活性明顯增強(qiáng)、染色深。ACPase：與正常對照組相比，模型對照組ACPase活性明顯增強(qiáng)，而實(shí)驗(yàn)組則有所下降。G6Pase：模型對照組G6Pase反應(yīng)顆粒比正常對照組明顯減少，染色淺；實(shí)驗(yàn)組G6Pase活性明顯增強(qiáng)、染色深。糖原：與正常對照組相比，模型對照組糖原含量減少，實(shí)驗(yàn)組糖原含量接近正常。結(jié)果見表1。表1各組乳鼠肝細(xì)胞細(xì)胞化學(xué)染色酶顆粒定量分析結(jié)果（略）與模型對照
6、組比較，*P0.001；與正常對照組比較，#P0.053.2掃描電鏡觀察正常對照組原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞表面微絨毛密集，細(xì)長，有分枝并相互交織。模型對照組微絨毛明顯矮小、稀疏，細(xì)胞存活率降低。實(shí)驗(yàn)組肝細(xì)胞表面微絨毛與模型對照組相比明顯增多、變高，接近正常對照組，而且細(xì)胞存活率也明顯高于模型對照組。4討論一般認(rèn)為，CCl4進(jìn)入機(jī)體后，被肝臟細(xì)胞色素P450激活，經(jīng)肝微粒體NADPH依賴的電子傳遞系統(tǒng)代謝為三氯甲基自由基（CCl3）和三氯甲基過氧自由基（OOCCl3），這兩種自由基可摻入到微粒體膜的磷脂部分，啟動脂質(zhì)過氧化，引起肝細(xì)胞的各種變化導(dǎo)致肝損傷［4］。SDH位于線粒體內(nèi)膜與呼吸鏈形成復(fù)合體，
7、由于過氧化脂質(zhì)的損傷作用，引起上述復(fù)合體的改變或破壞，進(jìn)而使SDH活性下降，由于CCl4作用產(chǎn)生的過氧化脂質(zhì)及脂質(zhì)過氧化物與蛋白質(zhì)分離產(chǎn)生溶酶體，因此，溶酶體數(shù)目增加，溶酶體的標(biāo)志酶ACPase活性增強(qiáng)。CCl4引起線粒體結(jié)構(gòu)的不完整和破壞，自然影響有氧代謝合成ATP的主要供給途徑，此時，肝細(xì)胞不得不大量分解糖原進(jìn)行無氧代謝合成ATP，導(dǎo)致糖原減少，而悅肝膠囊能明顯改善上述改變。我們的前期實(shí)驗(yàn)也表
