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《黑籽重樓種內(nèi)形態(tài)標(biāo)記和issr標(biāo)記的遺傳分化研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、黑籽重樓種內(nèi)形態(tài)標(biāo)記和ISSR標(biāo)記的遺傳分化研究作者：陳照，葉睿超，張瑞，李偉陽(yáng)，王麗【摘要】 該文對(duì)黑籽重樓Paristhibetica種內(nèi)兩變種——黑籽重樓原變種Paristhibeticavar.thibetica與無(wú)瓣黑籽重樓Paristhibeticavar.apetala在形態(tài)學(xué)及ISSR分子標(biāo)記上的差異進(jìn)行了研究和比較。形態(tài)特征分析表明黑籽重樓原變種與無(wú)瓣黑籽重樓在萼片長(zhǎng)寬、花藥數(shù)、花絲長(zhǎng)等7個(gè)花器官性狀方面有顯著差異，但通過(guò)在主成分分析圖上不能明顯區(qū)分兩個(gè)變種，兩變種總體形態(tài)上的分化不明顯。ISSR分析上，從100
2、個(gè)ISSR引物中篩選出8個(gè)引物，在300～1500bp間共擴(kuò)增出36條帶，其中黑籽重樓原變種特征帶有5條，無(wú)瓣黑籽重樓擴(kuò)特征帶有8條?！娟P(guān)鍵詞】黑籽重樓變種形態(tài)差異ISSR Abstract:ThemorphologicaldifferentiationanalysisonParisthibeticavar.thibeticaandParisthibeticavar.apetalaorphologicaldifferentiationbeters100ISSRprimers.And36bandsplifiedbyISSR-PCR,
3、ofpleSequenceRepeat，ISSR)是一種基于微衛(wèi)星序列發(fā)展起來(lái)的分子標(biāo)記［7］,具有簡(jiǎn)便、多態(tài)性高,穩(wěn)定性和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，在分類學(xué)、種系發(fā)生學(xué)、保護(hù)生物學(xué)和種群遺傳學(xué)等方面得到迅速應(yīng)用［6］。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)形態(tài)差異分析結(jié)合數(shù)量統(tǒng)計(jì)方法對(duì)不同生境下黑籽重樓原變種和無(wú)瓣黑籽重樓的14項(xiàng)形態(tài)特征進(jìn)行測(cè)定和分析，觀察黑籽重樓的種內(nèi)形態(tài)分化的水平，以達(dá)到了解其遺傳多樣性水平的目的。并采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)同域生長(zhǎng)的黑籽重樓種下的黑籽重樓原變種和無(wú)瓣黑籽重樓進(jìn)行分子水平的遺傳分化的研究，尋找區(qū)別兩變種的特征帶。 1材料和
4、方法 1.1材料用于形態(tài)分析的黑籽重樓共來(lái)自于10個(gè)居群，其中黑籽重樓原變種（Paristhibeticavar.thibetica）分別來(lái)自于不同的7個(gè)居群，無(wú)瓣黑籽重樓(Paristhibeticavar.apetala)分別來(lái)自于不同的3個(gè)居群（見(jiàn)表1）。表1形態(tài)分析材料（略） 用于ISSR分析的黑籽重樓原變種（Paristhibeticavar.thibetica）和無(wú)瓣黑籽重樓(Paristhibeticavar.apetala)均采集于四川彭州龍門(mén)山（海拔2560m），各變種各取3株，葉片均用硅膠干燥。憑證標(biāo)本藏于四
5、川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物標(biāo)本室?！ ?.2方法 1.2.1形態(tài)指標(biāo)測(cè)量及相關(guān)數(shù)據(jù)分析選取10個(gè)居群的黑籽重樓的14個(gè)形態(tài)學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。用SPSS13.0軟件計(jì)算各形態(tài)學(xué)指標(biāo)的平均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（δ）、單因素方差分析、使用NTSYS-PC2.10進(jìn)行主成分分析［8］?！ ?.2.2基因組DNA提取基因組DNA提取采用CTAB法［9］，提取的黑籽重樓原變種和無(wú)瓣黑籽重樓基因組DNA分別為各變種的3個(gè)個(gè)體的混合樣。通過(guò)1%的瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，-20℃保存?zhèn)溆??！ ?.2.3ISSR-PCR擴(kuò)增ISSR-PCR擴(kuò)增體系為20μl
6、的PCR反應(yīng)液。其中包括:10×buffer2.5μl，Mg2+2μl(2mmol/L)，dNTP2μl(0.12mmol/L)，ISSR引物2μl(1μmol)，Taq酶0.5μl(1.5U)，模板2μl(50～100ng)，超純水9.5μl。Taq酶，dNTP和均購(gòu)自Takara公司，ISSR引物序列由從加拿大哥倫比亞大學(xué)（UBC）提供?！ CR反應(yīng)程序?yàn)?4℃5min，1個(gè)循環(huán)；94℃30s，36℃60s，72℃90s，40個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5min。擴(kuò)增產(chǎn)物以Takara公司100bpDNAladder為分子標(biāo)記，經(jīng)1
7、.5%瓊脂糖凝膠電泳分離，電泳結(jié)束后用EB染色，并用GeneGeniusBioImagingSystem凝膠成像儀上成像觀察?！ ?結(jié)果與分析 2.1居群間形態(tài)變異對(duì)于來(lái)自于10個(gè)居群的黑籽重樓（黑籽重樓原變種7個(gè)居群，無(wú)瓣黑籽重樓3個(gè)居群）的14項(xiàng)形態(tài)特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（見(jiàn)表2），7個(gè)黑籽重樓原變種在居群間水平上，在除了葉片長(zhǎng)、萼片寬的12個(gè)性狀的差異極顯著。3個(gè)無(wú)瓣黑籽重樓在居群間水平上，葉柄長(zhǎng)、花藥數(shù)、花絲長(zhǎng)、花藥長(zhǎng)、萼片數(shù)5個(gè)形狀的差異顯著。表2居群間形態(tài)性狀的單因素方差分析（略） 2.2變種間形態(tài)差異為探討變種間的形態(tài)差
8、異，采用單因素方差分析對(duì)兩變種的各形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行了分析（見(jiàn)表3），14個(gè)形態(tài)特征中，兩個(gè)變種在花藥數(shù)、花絲長(zhǎng)、花藥長(zhǎng)、花瓣數(shù)、花瓣長(zhǎng)5個(gè)花器官性狀方面的差異達(dá)到極顯著，在萼片長(zhǎng)和寬上有顯著差異。表3兩變種具有顯著性差異的7個(gè)形態(tài)性狀的單
