hplc法測(cè)定鹿蹄草中槲皮素的含量論文

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1、HPLC法測(cè)定鹿蹄草中槲皮素的含量論文.freelm×150mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-0.1%磷酸(50∶50);檢測(cè)波長(zhǎng):370nm。結(jié)果槲皮素在0.092~0.46μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率為99.24%,RSD=0.70%。結(jié)論方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好,能有效測(cè)定鹿蹄草藥材中槲皮素含量。【關(guān)鍵詞】鹿蹄草;槲皮素;高效液相色譜法;含量測(cè)定Abstract:ObjectiveTosetupamethodfordeterminingthequercetininPyrolacalliathaH.Andres.MethodHPLCmeth

2、odn(4.6mm×150mm,5μm)obilephaseofmethanol-0.1%phosphoricacid(50∶50),andthedetecting.ResultThestandardcurveethodissimple,accurate,highlysensitiveandreproducible.ItcanbeusedforthequalitydeterminationofquercetininPyrolacalliathaH.Andres.Keyination鹿蹄草為鹿蹄草科植物鹿蹄草PyrolacalliathaH.Andres的干

3、燥全草,.freelm×150mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50);流速:1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):370nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μL。色譜圖見(jiàn)圖1。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取槲皮素對(duì)照品適量,加甲醇制成每1mL含槲皮素46μg的溶液,作為對(duì)照品溶液。2.3供試品溶液的制備取鹿蹄草粉末適量,取0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇-10%鹽酸(3∶1)的混合溶液50mL,稱定重量,回流1h,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.4

4、線性關(guān)系考察分別精密吸取槲皮素對(duì)照品溶液(46μg/mL)2、4、6、8、10mL,置于10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,各進(jìn)樣10μL,連續(xù)進(jìn)樣2次,測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=5.3287×102X-0.2009,r=0.9999,在0.092~0.46μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.5精密度試驗(yàn)取槲皮素對(duì)照品溶液,各重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積,結(jié)果槲皮素峰面積RSD=0.58%。2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批的樣品6份,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,測(cè)定鹿蹄草中槲皮素含量,結(jié)果RSD=

5、0.82%。2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液,分別于配制后0、4、8、12h依法測(cè)定峰面積,結(jié)果RSD=0.56%,表明樣品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.8加樣回收率試驗(yàn)取已知槲皮素含量的鹿蹄草粉末,取約0.5g,分別精密稱定,平行稱取6份,各加入一定量的槲皮素對(duì)照品,制備成供試品溶液,在所確定的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果槲皮素平均加樣回收率為99.24%,RSD=0.70%,說(shuō)明該方法準(zhǔn)確可靠。結(jié)果見(jiàn)表1。表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)2.9樣品測(cè)定取3個(gè)不同產(chǎn)地鹿蹄草,測(cè)定其中槲皮素含量,結(jié)果見(jiàn)表2。表2鹿蹄草中槲皮素含量測(cè)定結(jié)果(略)3討論本試驗(yàn)曾經(jīng)考查了

6、直接加甲醇超聲后測(cè)定鹿蹄草中槲皮素的含量,結(jié)果色譜峰的峰形不理想,而且槲皮素的提取也不充分。對(duì)于水解條件的選擇,本試驗(yàn)考察了不同濃度的甲醇及提取時(shí)間和鹽酸濃度及酸水解時(shí)間的影響。結(jié)果顯示,用甲醇-10%鹽酸(3∶1)回流1h,能使鹿蹄草中的槲皮素以苷元形式水解完全。在色譜條件摸索時(shí),發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相pH值對(duì)色譜峰的峰形及分離度影響很大,比較甲醇與不同濃度的磷酸溶液等多種溶劑系統(tǒng),確定流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50),得到的色譜峰峰形及分離度較好,并且基線穩(wěn)定。【

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