rphplc法測(cè)定小鼠血漿中蒿甲醚的濃度論文

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1、RPHPLC法測(cè)定小鼠血漿中蒿甲醚的濃度論文【摘要】目的建立測(cè)定小鼠血漿中蒿甲醚濃度的方法。方法采用RPHPLC法，色譜柱為DiamonsilC18柱（150mm×4.6mm,5μm），流動(dòng)相為甲醇水（體積比85∶15）；流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長為210nm；柱溫為室溫。利用甲基叔丁基醚對(duì)小鼠血漿及組織中蒿甲醚及蒿乙醚進(jìn)行提取后進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果蒿甲醚與蒿乙醚的色譜峰分離良好并且出峰時(shí)間相近，以蒿乙醚為內(nèi)標(biāo)測(cè)定血漿中蒿甲醚符合方法學(xué)要求，血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線在一定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9991,n=5）,高、中、低3個(gè)濃度的

2、回收率均為97%以上，日內(nèi)及日間RSD均小于3%。結(jié)論建立的方法可簡單快速測(cè)定蒿甲醚在小鼠血漿中的濃度，為內(nèi)標(biāo)法測(cè)定蒿甲醚在動(dòng)物血漿中的濃度提供思路?！娟P(guān)鍵詞】蒿甲醚；蒿乙醚；高效液相色譜法；內(nèi)標(biāo)法；血藥濃度ContentanalysisofartemetherinmiceplasmabyRPHPLCethodsArtemetherandarteehterinmiceplasmaethyltertbutyletherbeforedetection,thenanalyzedonaDiamonsilC18column（150mm×4.6

3、mm,5μm）.ThemobilephaseconsistedofmethanolL/min.Theandroomtemperatureinationofartemether.ResultsThechromatographicpeaksofartemetherandarteetherilarretentiontimesattheselectedHPLCcondition.Thereetheranalysisorethan96%duringhigh,middleandloether.RSDsofetherinplasmacouldbea

4、nalyzedeasilyandrapidlybytheestablishedHPLCmethod.Keyether;arteether;HPLC;innerstandardmethod;blooddruglevel青蒿素（qinghaosu,.freelether,ARM)近年來頗為引人關(guān)注.freelether(B)andarteether(C)1儀器與試藥1.1儀器高效液相色譜儀（LC10ATVP泵，SPD10AVP紫外檢測(cè)器，日本島津公司），TGL16G高速微型臺(tái)式離心機(jī)（上海醫(yī)分儀器制造有限公司），802離心機(jī)（金壇市

5、榮華儀器制造有限公司），XE,國藥試劑集團(tuán)）。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠：沈陽藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（遼)2003-008。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：DiamonsilC18柱（150mm×4.6mm,5μm,迪馬科技有限公司）；流動(dòng)相：甲醇水（體積比85∶15）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長：210nm；柱溫：室溫30℃;進(jìn)樣量：20μL。2.2血漿樣品的處理取昆明種小鼠數(shù)只，摘眼球后取血于涂有肝素的小試管內(nèi)，取離心后的上層血漿250μL于10mL具塞試管內(nèi)，分別加入6.32mg/mL的蒿甲醚甲醇

6、溶液20μL,63.2mg/mL的蒿甲醚甲醇溶液5μL,15μL。渦旋3min，再加入5mL甲基叔丁基醚渦旋3min,3500r/min下離心3min后取上清液3mL，氮?dú)獯蹈?，用甲?50μL溶解，進(jìn)樣20μL，記錄峰面積。2.3方法專屬性從圖2可見，蒿甲醚與蒿乙醚的出峰時(shí)間分別為6.5min和8.28min,兩種物質(zhì)的出峰時(shí)間相近，并且都能在10min之前出峰，分離度良好（R=6.14）。2.4血漿中蒿甲醚含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取3份250μL小鼠血漿，分別加入6.32mg/mL蒿甲醚甲醇溶液10、20、30、40μL和63.2mg

7、/mL蒿甲醚甲醇溶液15μL，15.82mg/mL的內(nèi)標(biāo)蒿乙醚20μL，以蒿甲醚與蒿乙醚峰面積的比值為橫坐標(biāo)，蒿甲醚在小鼠血漿中的濃度為縱坐標(biāo)作圖得內(nèi)標(biāo)法的線性關(guān)系曲線，y=243.44x+4.152，R2=0.9991，線性范圍0～3.792mg/mL。A.甲醇溶液中蒿甲醚(ARM)與蒿乙醚(ARE)的色譜圖B.提取后的空白血漿色譜圖C.提取后的空白血漿中添加蒿甲醚與蒿乙醚后的色譜圖D.甲醇溶液中青蒿素(QHS)與蒿甲醚的色譜圖圖2高效液相色譜圖（略）Fig.2HPLCchromatograms2.5提取回收率按“2.1.2”項(xiàng)下處理

8、血漿樣品后，高、中、低3個(gè)濃度的蒿甲醚在小鼠血漿中的提取回收率(n=3)分別為(84.8±1.6)%，(83.5±1.1)%，(73.0±2.9)%。2.6方法回收率分別量取250μL小鼠血漿，精密加入6.