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《孕婦外周血胎兒細胞的富集技術及其在產(chǎn)前診斷中的應用論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、孕婦外周血胎兒細胞的富集技術及其在產(chǎn)前診斷中的應用論文羊膜穿刺和絨毛吸取是目前常用的產(chǎn)前診斷技術，但其操作具有創(chuàng)傷性，可導致宮內(nèi)感染、羊膜破裂、流產(chǎn)、胎兒畸形或死亡等［1］。建立非創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷方法，降低產(chǎn)前診斷的風險，是產(chǎn)前診斷工作的一項重大課題。自50年代從孕婦外周血中發(fā)現(xiàn)胎兒細胞后，學者們開始關注這類細胞在產(chǎn)前診斷中的應用價值，但因技術條件的限制，這一非創(chuàng)傷性診斷方法進展緩慢。直至80年代中期.freelRNA基因信號，提示HLA-G很可能是胎兒NRBC的另一抗原標志。1.3消長規(guī)律探討胎兒細胞的消長規(guī)律有助于選擇產(chǎn)前診斷的最佳時間。Tom
2、as等［9］發(fā)現(xiàn)人工受精的婦女血液檢出Y染色體特異性序列的時間為4周零5天，最遲50天，首次檢出的平均時間為6周±4天，消失時間為產(chǎn)后2個月。Simpson等［10］研究發(fā)現(xiàn)，從孕婦外周血分離胎兒NRBC的最佳時間為妊娠后10～18周。馬旭等［11］發(fā)現(xiàn)19例妊娠男胎婦女外周血Y染色體鋅指蛋白基因(ZFY)在妊娠6周、11周、14周時的檢出率分別為5.3%、68.4%和95.0%，同時還發(fā)現(xiàn)妊娠女胎的婦女外周血無1例ZFY假陽性，提示分離胎兒NRBC進行產(chǎn)前診斷的最佳時間為妊娠14周。1.4含量胎兒NRBC含量高低關系到產(chǎn)前診斷的準確性。眾多的研
3、究表明，胎兒細胞與母體在細胞之比為1∶5000～1∶20000，其中胎兒NRBC的比例在1∶105～1∶109之間。從理論上，只要有理想的富集、分析方法，胎兒NRBC含量完全可以滿足診斷需要。2胎兒細胞的富集純度和產(chǎn)量是衡量胎兒細胞富集效力的兩個重要概念，純度是指分離后樣本內(nèi)胎母細胞百分比，產(chǎn)量是指實際獲得的胎兒細胞數(shù)，不同方法對富集胎兒細胞的純度和產(chǎn)量有很大影響，現(xiàn)就現(xiàn)有的富集方法分述如下。2.1密度梯度離心法利用聚蔗糖與泛影酸鈉混合物作分離介質(zhì)，加至孕婦血中離心，根據(jù)細胞密度的差異分離出胎兒細胞。該法簡便易行，但胎兒細胞的純度和產(chǎn)量不高。宋杰
4、等［12］用此法分離胎兒細胞預測胎兒性別的靈敏度和特異度分別為84.85%和96.77%，總符合率為90.63%。2.2γ珠蛋白陽性選擇法胎兒血紅蛋白主要為HbF，而成人為HbA。HbF由兩條α珠蛋白和兩條γ珠蛋白鏈組成；HbA由兩條α珠蛋白和兩條β珠蛋白鏈組成。利用抗γ珠蛋白的單克隆抗體通過流式細胞計數(shù)儀可富集胎兒NRBC。Zheng等［3］證實83%～100%抗γ珠蛋白陽性細胞為孕婦血液中的胎兒細胞。2.3熒光激活細胞分類法又稱流式細胞計數(shù)儀分離法。先制備單核細胞懸液，用熒光素激活胎兒NRBC，利用流式細胞計數(shù)儀將胎兒NRBC從孕婦血液中分離
5、出來。Bianchi等［5］用熒光素標記抗CD71、CD36、GPA抗體后分離胎兒NRBC，再用PCR進行Y染色體序列分析，發(fā)現(xiàn)單獨用抗CD71、CD36富集胎兒NRBC診斷胎兒性別的準確度分別為57%和88%，而單獨用抗GPA或同時使用抗CD71、CD36富集胎兒NRBC診斷胎兒性別的準確度為100%。A,1993,270(19)∶2357-2361.［11］馬旭，王毅，王琳，等.經(jīng)母血采集胎兒細胞行產(chǎn)前診斷的最佳時間探討.中華婦產(chǎn)科雜志1997，32(5)∶293-295.［12］宋杰，李守柔，張愛臣，等.富集孕婦外周血中胎兒細胞行性別診斷.
6、中華婦產(chǎn)科雜志，1998，33(1)∶74-76.［13］ZhengYL,CarterNP,PriceCM,etal.Prenataldiagnosisfrommaternalblood:simulataneousimmuophnotypingandFISHoffetalnucleatederythrocyteisolatedbynegativemagiccellsortion.JMedGe,1993,30(12)∶1051-1056.［14］D,PatelP,D,PatelP,Baiget,etal.Prenatalsexdeterminati
7、onfrommaternalperipheralbloodusingpolymerasechainreaction.HumGe,1993,90(5)∶483-488.［18］馬旭，張思仲，羅安雪，等.利用孕婦血中胎兒細胞進行產(chǎn)前診斷的初步研究：胎兒SRY基因的鑒定.中華醫(yī)學遺傳學雜志，1995，12(5)∶265-269.［19］LoYMD,BoinationoffetalRhesusDstatusbyDNAamplificationofperipheralbloodofRhesus-negativemothers.AnnNYAcadSci,19
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