bmp2活性多肽體外定向誘導(dǎo)大鼠bmscs 向成骨方向分化的實驗研究

《bmp2活性多肽體外定向誘導(dǎo)大鼠bmscs 向成骨方向分化的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、BMP2活性多肽體外定向誘導(dǎo)大鼠BMSCs向成骨方向分化的實驗研究【摘要】骨形成蛋白2（BMP2）具有較強的誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）向成骨方向定向分化的能力。天然的BMP2數(shù)量有限，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，限制了其廣泛應(yīng)用。本實驗設(shè)計合成了BMP2活性多肽，體外試驗探討其對BMSCs向成骨方向定向誘導(dǎo)成骨分化的能力，評價BMP2活性多肽的誘導(dǎo)成骨效應(yīng)。［方法］實驗分2組，誘導(dǎo)組和非誘導(dǎo)組。取4周的SCs，傳至第3代時，實驗組，改用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基（DMEM完全培養(yǎng)基+BMP2活性多肽200μg／ml）。非誘導(dǎo)組，仍采用DMEM完全培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)2~4周，采用細胞爬片培養(yǎng)、堿性磷酸

2、酶活性和鈣含量測定、實時定量PCR檢測Ⅰ型膠原（ColⅠ）及骨橋蛋白（OPN）mRNA的表達，評價BMP2活性多肽的體外誘導(dǎo)成骨能力。［結(jié)果］誘導(dǎo)組BMSCs生長良好，表現(xiàn)出與典型的成骨細胞相似的形態(tài)特征和生物學(xué)特性，ALP活性上升，鈣含量增加，ColⅠ和OPN的mRNA呈高表達。非誘導(dǎo)組，成骨特性不明顯。［結(jié)論］合成的BMP2活性多肽能有效地促進BMSCs向成骨方向分化，是組織工程化骨中理想的誘導(dǎo)成骨的細胞因子。具有與天然BMP2類似的骨誘導(dǎo)活性，具有廣闊的應(yīng)用前景?！娟P(guān)鍵詞】BMP2活性多肽骨髓間充質(zhì)干細胞導(dǎo)成骨Abstract：［Objective］Toinvestigate

3、thecapabilityofsynthesisBMP2derivedpeptideonosteogenicinductioninbonemarrocells(BMSEs),andtoevaluatetheosteoinductivityofBMP2derivedpeptideinvitro.［Method］Aftersegregatingandcultivatingfourarroalcellsininductiongroupediumcontaining200gg/mlBMP2derivedpeptide,andinnoninductionalgroupBMSCsedium.

4、Follopreparation,alkalinephosphataseactivityandcalciumdepositioneasured.TypeIcollagen（）andosteopontin（OPN）mRNAexpressioneasuredusingrealtimefluorescentquantitativepolymerasechainreaction（FQPCR）technique.ThecapabilityofsynthesisBMP2derivedpeptideonosteogenicinductionofBMSCsorphology,andshoorpholo

5、giecharacteristicssimilartothoseofosteoblasts.Theleverofalkalinephosphataseactivityandcalciumdepositionincreased.ColⅠandOPNmRNAilarcapacityofosteogenicinductionasnatureBMP2,soBMP2derivedpeptideisanidealcellagentforbonetissueengineering,andcanbeavailableesenchymalstemcells，BMSCs）具有多向分化潛能，在一定細胞因子作

6、用下可向成骨細胞方向分化，目前已成為骨組織工程理想的種子細胞〔1〕。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bonemorphogeicprotEins，BMP）屬于TGFβ超家族成員，是一種多功能的生長因子，其中BMP2是最主要的骨形成調(diào)控因子〔2、3〕。天然BMP2數(shù)量有限，且生物活性難以發(fā)揮〔4、5〕。本實驗根據(jù)BMP2的核心功能區(qū)氨基酸序列，固相合成法合成一條含24個核苷酸的短肽——BMP2活性多肽，體外誘導(dǎo)大鼠的BMSCs向成骨方向定向分化，評價其誘導(dǎo)效能。1材料與方法1.1主要儀器和試劑倒置相差顯微鏡（Axiovert35，ZEIssCorp，Germany）；低糖DMEM培養(yǎng)基（Cibco）；

7、胎牛血清（Cibco）；胰蛋白酶（Sigma）；堿性磷酸酶（ALP）活性試劑盒（南京間建成生物工程有限公司）；細胞鈣含量試劑盒（Sigma公司）；BMP2活性多肽（本課題組與吉爾生化上海有限公司聯(lián)合研制）。1.2BMSCs分離和培養(yǎng)取4周齡健康EM完全培養(yǎng)基（含20％小牛血清，100mg／ml青霉素，100mg／ml鏈霉素）自一端沖洗，制成單細胞懸液，以3×104／ml細胞數(shù)接種至100ml培養(yǎng)