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1、分類號：密級：學號：2015202114單位代碼：10759石河子大學碩士學位論文KLD-12多肽/rhBMP-2纖維凝膠復合BMSCs誘導異位成骨的實驗研究學位申請人杜龑指導教師孫建華申請學位門類級別醫(yī)學碩士學科、專業(yè)名稱外科學研究方向脊柱外科所在學院醫(yī)學院中國·新疆·石河子2018年5月ExperimentalstudyofinduceingectopicossificationofKLD-12polypeptide/rhBMP-2nanofibergelcombinewithBoneMar
2、rowMesenchymalStemCellsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByDuYan(SpineSurgery)Supervisor:SunJianhuaMay,2018摘要目的：探討KLD-12多肽/重組人類骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（recombinanthumanbonemorphogeneticprotei
3、n2，rhBMP-2）纖維凝膠復合兔BMSCs在兔臀肌內(nèi)的成骨效果。方法：取6月齡新西蘭大白兔48只，體重3.0-3.5kg，雌雄不限，密度梯度法分離培養(yǎng)兔BMSCs，隨機分為A、B、C、D4組，每組12只。A組（實驗組）：兔臀肌植入KLD-12多肽/rhBMP-2/BMSCs凝膠；B組（陽性對照組）：臀肌內(nèi)植入KLD-12多肽/rhBMP-2凝膠；C組（陽性對照組）：臀肌內(nèi)植入rhBMP-2；D組（陰性對照組）：臀肌內(nèi)植入KLD-12凝膠。分別于術(shù)后4周、8周、12周行X線、Micro-CT、
4、大體觀察、組織形態(tài)學染色、堿性磷酸酶（ALP）活性檢測。結(jié)果：（1）X線：A、B、C三組在植入后4周，兔臀肌均出現(xiàn)成骨表現(xiàn)，成骨區(qū)面積隨時間推移逐漸增大；D組：無成骨影像表現(xiàn)。（2）Micro-CT結(jié)果：骨塊形狀不規(guī)則，外層骨質(zhì)向骨塊中央部不規(guī)則延伸。隨時間推移，各組骨體積分數(shù)、骨小梁數(shù)量、骨小梁厚度、組織骨密度逐漸增大。12周時，骨體積分數(shù)BV/TV（%）：A組24.274±1.034、B組21.141±0.998、C組20.163±1.096；骨小梁數(shù)量TB.N（個/mm3）：A組6.869
5、±0.247、B組5.616±0.232、C組5.098±0.199；組織骨密度TMD(mg/cm3)：A組409.363±12.933、B組370.366±9.733、C組350.396±13.379；骨小梁厚度Tb.Th(mm)：A組0.104±0.006、B組0.092±0.004、C組0.083±0.005，以上Micro-CT各指標測得的數(shù)據(jù)，A組與B組相比、A組與C組相比、A組與B、C兩組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（3）大體標本觀察：4周時：A、B、C三組可見鈣化結(jié)節(jié)，
6、鉗夾硬度均較低；8周、12周時：A、B、C三組骨組織硬度均較高；D組：未發(fā)現(xiàn)骨組織（4）HE染色：100×，第4周時：A組可見編織骨和類骨質(zhì)，B組可見少量形成的骨小梁，C組可見少量編織骨和類骨質(zhì)；8周時：A組可見較成熟板層骨及少許編織骨，B組可見大量編織骨，C組可見少量成熟板層骨及大量編織骨；12周時：A、B兩組為較成熟骨組織，C組為較成熟骨組織和少量編織骨。（5）姬姆薩染色（Giemsa染色）：4周時：A組可見少量的深藍色的成熟骨組織，B組可見較多量湖藍色類骨質(zhì)，C組可見淺藍色新礦化骨；8周時
7、：A組可見較多量深藍色成熟骨組織，B組可見少量深藍色成熟骨組織，C組可見少量深藍色成熟骨組織，并見較多量的淺藍色新礦化骨；12周時：A組可見大量深藍色成熟骨組織，B組可見較多量深藍色成熟骨組織，C組可見深藍色成熟骨組織和淺藍色新礦化骨。（6）ALP活性（金氏單位/gprot）：12周時：A組20.236±0.351、B組17.697±0.533、C組16.981±0.246，A組與B組相比、A組與C組相比、A組與B、C兩組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：KLD-12多肽/rhBM
8、P-2凝膠復合BMSCs在臀肌內(nèi)成骨活性良好，在KLD-12多肽凝膠內(nèi)，BMSCs與rhBMP-2可以相互促進成骨活性?！娟P(guān)鍵詞】KLD-12多肽；rhBMP-2；骨組織工程；異位成骨IAbstractObjective:ToinvestigatetheectopicosteogenicactivityofKLD-12polypeptide/recombinanthumanbonemorphogeneticprotein-2(rhBMP-2)nanofibergelcombinewithbone
