wortmannin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠肺損傷的保護(hù)作用論文

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1、wortmannin對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠肺損傷的保護(hù)作用論文【摘要】目的：觀察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制劑annin對(duì)重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠肺損傷的保護(hù)作用并探討其機(jī)制.方法：將健康成年SD大鼠54只隨機(jī)分為對(duì)照組、SAP組和SAP＋annin組，每組18只，逆行膽胰管注射50g/L?；悄懰徕c制備SAP模型.檢測(cè)血清TNFα水平、肺組織濕/干質(zhì)量比值、肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性、支氣管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量；觀察肺組織及胰腺組織的病理變化.結(jié)果：SAP組較對(duì)照組血清TNF

2、α水平、肺組織濕/干質(zhì)量比值、BALF蛋白含量及肺組織MPO活性均顯著升高（P0.01），胰腺、肺組織病理?yè)p傷隨病情進(jìn)展而逐漸加重；SAP＋annin組較對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)均升高，但較SAP組均明顯降低（P0.01），胰腺、肺組織病理?yè)p傷較SAP組減輕.結(jié)論：annin對(duì)SAP大鼠肺損傷有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與其抑制了中性粒細(xì)胞內(nèi)PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，使多種炎癥細(xì)胞的活化和TNFα等炎癥因子的釋放受到抑制有關(guān).【關(guān)鍵詞】重癥急性胰腺炎annin中性粒細(xì)胞磷脂酰肌醇3激酶肺/損傷0引言重癥急性胰

3、腺炎（severeacutepancreatitis,SAP）占急性胰腺炎病例的10％～25％.freelannin是磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抑制劑，可抑制中性粒細(xì)胞的募集和活化，從而減少炎癥因子的釋放，annin能否減輕SAP過(guò)程中的肺損傷，目前文獻(xiàn)報(bào)道甚少.我們通過(guò)annin對(duì)大鼠的預(yù)處理，來(lái)觀察其對(duì)SAP時(shí)肺損傷的保護(hù)作用.1材料和方法1.1材料annin（Sigma公司）；?；悄懰徕c（Sigma公司），溶于9mL/L生理鹽水，終濃度50g/L；大鼠TNFαELISA試劑盒（

4、晶美生物工程公司）；雌性SD大鼠54只（第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），體質(zhì)量220～270g.UV7504型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精密儀器儀表有限公司）.1.2方法1.2.1動(dòng)物分組將SD大鼠隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、SAP組和SAP＋annin組，每組18只，每組又分為術(shù)后3，6，12h組，每組6只.1.2.2模型建立大鼠術(shù)前12h禁食，自由飲水.用10g/L戊巴比妥鈉以30mg/kg腹腔注射.取上腹部正中切口，顯露胰腺，確認(rèn)膽胰管，動(dòng)脈夾夾閉其遠(yuǎn)端（靠近十二指腸）、近端（左右肝管匯合處）；SAP組用1

5、mL注射器針穿刺貼近膽胰管十二指腸開(kāi)口處膽管，以0.2mL/L的速度勻速逆行注入50g/L牛磺膽酸鈉（0.8mL/kg），注射完畢后動(dòng)脈夾繼續(xù)夾閉膽胰管3～4min，以使?；悄懰徕c充分進(jìn)入胰腺，關(guān)腹.對(duì)照組給予等量生理鹽水注入，SAP＋annin組于建模前給予annin1.4mg/kg，ip［3］，對(duì)照組和SAP組給予等量對(duì)應(yīng)溶劑.1.2.3標(biāo)本收集分別于建模后3，6，12h每組處死6只大鼠，門(mén)靜脈取血，觀察胰腺大體病理改變，并留取胰腺組織，40mL/L多聚甲醛固定，待病理切片；解剖胸腔暴露肺，觀察肺大

6、體病理改變.做右側(cè)肺支氣管肺泡灌洗，灌洗液收集后待測(cè)蛋白含量；取小塊左下肺組織，迅速置入凍存管-80℃凍存，待測(cè)MPO活性；另取一小塊左下肺葉組織，40mL/L多聚甲醛液固定，待病理切片檢查.1.2.4血清TNFα含量測(cè)定門(mén)靜脈取血，置室溫下1h，待樣本完全凝固后以2500r/min速度離心15min，吸取上清，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明測(cè)定3，6，12h血清TNFα含量.1.2.5肺組織濕/干質(zhì)量（PO活性檢測(cè)取左肺組織約100mg，加5g/L溴化十六烷基三甲胺（HTAB）1mL制備勻漿，反復(fù)凍融

7、3次并超聲粉碎(10s，3次)，4℃，3000r/min離心30min，取上清0.1mL加入鄰聯(lián)二茴香胺緩沖液2.9mL，保持溫度于25℃，立即在分光光度計(jì)460nm波長(zhǎng)下進(jìn)行2min的掃描，記錄第30s和第90s的吸光度差值，以此1min內(nèi)吸光度的變化代表酶活力的改變，MPO活力單位(U/g)=(ΔA460nm/min)/11.3×(g/L).其中，g為所加組織量，L為反應(yīng)液.1.2.8病理形態(tài)學(xué)觀察對(duì)胰腺組織、肺組織常規(guī)石蠟包埋，4μm切片，HE染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察病理改變.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:使用SP

8、SS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s表示，各組血清TNFα,肺PO活性比較行t檢驗(yàn).2結(jié)果2.1血清TNFα的變化SAP大鼠模型誘導(dǎo)成功后，SAP組各時(shí)間點(diǎn)血清TNFα濃度較對(duì)照組明顯升高（P0.01），以3h濃度最高，而后逐漸降低；SAP＋annin組血清TNFα濃度與SAP組比較明顯下降（P0.05，表1）.表1anin預(yù)處理對(duì)SAP大鼠血清TNFα的影響(略)2.2肺PO水平的變化SAP組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺組織MPO水平