柱前衍生反相高效液相色譜法測定毛脈酸模根中氨基酸的含量論文

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1、柱前衍生反相高效液相色譜法測定毛脈酸模根中氨基酸的含量論文岳云飛王振月王謙博【摘要】目的采用柱前衍生法測定毛脈酸模根中氨基酸的含量。方法利用柱前衍生反相高效液相色譜（RPHPLC）法測定毛脈酸模根中16種氨基酸。采用DikmaC18色譜柱；流動相：A為0.05mol/L乙酸鈉溶液中含1%N,N二甲基甲酰胺，B為乙腈水（1∶1），梯度洗脫；流速1.0ml/min；檢測波長360nm；柱溫40℃。結果氨基酸的摩爾濃度與峰面積成良好的線性關系，r均在0.999以上；16種氨基酸的回收率為94.7%～112.9%。結論該方法準確、重現(xiàn)性好，可用于毛脈酸

2、模根中氨基酸的含量測定?！娟P鍵詞】毛脈酸模氨基酸高效液相色譜法Abstract:ObjectiveTodeterminetheaminoacidsinrootofRumexgmelininderivatization.MethodsSixteenkindsofaminoacidsinedinrootofRumexgmelinibypre-columnofRPHPLC.HPLCanalysisedonDikmaC18columnixtureof0.05mol/Lsodiumacetatetocontain1%N,N-dimethylformamide

3、(A)andacetonitrile-obilephaseingradientmode.Theflol/min.Thedetectionandthecolumntemperatureolarconcentrationsofaminoacidsandpeakareasachievedanicelinearrelationship(rinoacidsethodisaccurateandrepeatableforthedeterminationofaminoacidsinRumexgmelini.Keyexgmelini;Aminoacids;HPLC毛脈

4、酸模RumexgmeliniTurcz.為蓼科（Polyonaceae）酸模屬多年生宿根草本植物，廣泛分布于黑龍江省大小興安嶺及張廣才嶺等地區(qū)，是黑龍江省、吉林長白山地區(qū)的重要藥用資源植物。以根入藥，味甘.freelaC18（200mm×4.6mm，5μm），Mettler電子天平AE240（瑞士），DIKMA微孔濾膜（0.45μm），ZK82B型真空干燥箱（上海市實驗儀器總廠）。門冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、絲氨酸（Ser）、精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、蘇氨酸（Thr）、脯氨酸（Pro）、丙氨酸（Ala）、纈氨酸（Val）、蛋氨酸

5、（Met）、胱氨酸（Cys）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、賴氨酸（Lys）、酪氨酸（Tyr）、色氨酸（Try）購于Agilent公司；甲醇、乙腈為美國Dikma公司產(chǎn)品，色譜純；水為自制重蒸水；其余均為分析純。樣品于20041001采自黑龍江中醫(yī)藥大學藥用植物園（所有樣品均由黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院中藥資源與開發(fā)教研室王振月教授鑒定）。2方法與結果2.1色譜條件色譜柱為DikmaC18柱；流動相：A：0.05mol/L乙酸鈉溶液中含1%N,N二甲基甲酰胺，B：乙腈水（1∶1），流動相梯度洗脫程序見表1；柱溫40℃；流速1.0ml/mi

6、n；檢測波長360nm；進樣量：對照品溶液進樣20μl；供試品溶液進樣50μl。表1流動相梯度洗脫程序（略）2.2供試品溶液的制備將采集后的樣品置40℃干燥后，粉碎成粉末（過80目篩），精密稱取粉末0.2g，置索氏提取器中，以50%乙醇為溶劑回流4h，提取液回收至干，殘渣用水溶解，過濾，濾渣和濾器用水洗滌，將濾液和洗液合并，用水定容至10ml，作為供試品溶液。2.3供試品的衍生取供試品1.0ml，加入0.5mol/L碳酸鈉緩沖液（以0.5mol/L碳酸鈉調0.5mol/L碳酸氫鈉置pH為9.0）1.0ml和1%的2,4－二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml

7、，搖勻，60℃水浴暗處放置60min，取出冷卻后，加入磷酸鹽緩沖液（pH7.0）10ml，搖勻，過0.45μm的濾膜。2.4對照品溶液的制備取Agilent公司提供的對照品溶液，分別制備成濃度為25，100，250，500，1000pmol/μl的對照品溶液，按2.3項下衍生后進樣20μl，以峰面積為橫坐標，濃度為縱坐標作曲線（見表2）。樣品和標準品的色譜圖見圖1。表216種氨基酸的標準曲線（略）圖1毛脈酸模樣品（a）和氨基酸混合標準溶液（b）的HPLC圖（略）2.5精密度實驗用氨基酸混合標準品溶液做6次平行實驗，結果16種氨基酸的RSD均小于5%。

8、表明精密度良好。2.6穩(wěn)定性實驗取毛脈酸模根的粉末0.2g1份。按2.2項，2.3項下制備供試品溶液，分別在