正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選參芪補(bǔ)血顆粒的提取工藝論文

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1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選參芪補(bǔ)血顆粒的提取工藝論文李曉曄,劉文星,米存云,裴軍平,秦向陽(yáng)【關(guān)鍵詞】參芪補(bǔ)血顆粒;,,正交實(shí)驗(yàn);,,高效液相色譜法;,,黃芪甲苷摘要:目的研究參芪補(bǔ)血顆粒劑的最佳提取工藝。方法選用L9(34)正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),并以黃芪甲苷(C41H68O14)和干膏得率作為考察指標(biāo),考察乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響。結(jié)果參芪補(bǔ)血顆粒的最佳提取工藝為用65%的乙醇8倍量,回流提取3次.freelalextractivetechniquesofShenqibuxueGranules.Me

2、thodsL9(34)orthogonalexperimententsinextractivetechniques.Theyieldofastragaloside(C41H68O14)anddryextractconditionedextractingcrudedrugsfromalcohol.Moneover,inthelightofcontentindexes,fourfactorsmustbetakenintoconsideration:thefrequencyandtimeofextracting,th

3、equantityandconcentrationofalcohol.ResultsTheoptimalextractivetechniqueses,eachtimefor1.5h.ConclusionTheproposedmethodsresultingoodreproducibilityasalextractivetechniques.Keyent;HPLC;Astragaloside參芪補(bǔ)血顆粒是由黃芪、當(dāng)歸、制首烏、黨參等6味中藥組成的中藥復(fù)方制劑。主要用于治療貧血和放射、化療時(shí)引起的白細(xì)胞、血小板減少

4、等血虛癥。黃芪系方中君藥,黃芪甲苷為其活性成分之一,對(duì)藥物和放射所致白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞降低具有明顯的改善作用[1],并且其穩(wěn)定性好。因此,測(cè)定提取液中黃芪甲苷的含量可作為評(píng)價(jià)本制劑質(zhì)量的客觀指標(biāo)之一,浸膏提取量也可作為有效成分提取率的指標(biāo)。故為了發(fā)揮藥物的最佳療效,優(yōu)化制備工藝,本文以黃芪甲苷含量為指標(biāo)、結(jié)合浸膏得率,用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選本制劑的最佳提取工藝,為工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。1儀器與試劑DIONEXSummit680高效液相色譜儀(美國(guó)):DIONEXP680HPLCPUMP,ThermostattedColu

5、mnpartmemtTCC-100,Alltech2000ES型ELSD、DIONEXChromenleonChromatographyManagementSystem;SK250LH型超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);ZORBAXExtendC18(4.6mm×150mm,5μm美國(guó)安捷倫科技有限公司)色譜柱。黃芪甲苷對(duì)照品(0781200311)中國(guó)藥品生物制品檢定所;參芪補(bǔ)血顆粒由第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所和化學(xué)教研室研制;乙腈為色譜純,水為超純水,其他試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1高效液相色譜方法

6、的建立2.1.1色譜條件流動(dòng)相乙腈水(32∶68);流速:1.0mlmin-1;柱溫:25℃;Alltech2000ES型ELSD;飄移管溫度:100.6℃;氣體流速:2.7Lmin-1;進(jìn)樣量:20μl;理論塔板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算大于5000。色譜圖見(jiàn)圖1。a-對(duì)照品b-供試品圖1色譜圖(略)2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品12.5mg置于25ml容量瓶中,加入無(wú)水甲醇定容至25ml,配制為0.5mgml-1的黃芪甲苷對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。用移液管分別精密移取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6

7、.0ml黃芪甲苷對(duì)照品儲(chǔ)備溶液置10ml容量瓶中,加甲醇定容,分別得到濃度為0.05,0.10,0.15,0.20,0.25,0.30mgml-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,用0.45μm微孔濾膜濾過(guò),進(jìn)樣20μl在給定色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。以進(jìn)樣量的常用對(duì)數(shù)值(x)為橫坐標(biāo),蒸發(fā)光峰面積的常用對(duì)數(shù)值(y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為:y=0.957+1.635x,r=0.9992,黃芪甲苷在1.0~6.0μg的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.2提取方法的選擇2.2.1醇提正交實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)研究及預(yù)實(shí)驗(yàn),設(shè)計(jì)提取工藝的正交實(shí)

8、驗(yàn)因素水平,結(jié)果見(jiàn)表1。表1因素水平表(略)根據(jù)因素水平表,選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(見(jiàn)表2)。每份稱取參芪補(bǔ)血顆粒原藥材36g,按正交表實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行提取,提取液減壓濃縮并用雙蒸水定容到200ml的容量瓶中,超聲溶解,以供測(cè)定兩個(gè)檢測(cè)指標(biāo)的含量。2.2.2提取液中黃芪甲苷和干浸膏得率的測(cè)定提取液中黃芪:甲苷含量測(cè)定用移液管精密移取2.2.1項(xiàng)下定容到200ml的提取液50ml

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