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1、SSR分子標(biāo)記技術(shù)及其在構(gòu)建玉米DNA指紋庫上的應(yīng)用論文.freelplesequencerepeat(SSR)markersonthebasisofPCRasatechnologyofdetectionDNApolymorphismhavebeeneresearchinsomefields.Inthepaper,thetheories,types,functionsandsourcesofprimersbySSRmarkeraizeDNAfingerprintingpoolconstructi
2、onbySSRaizeDNAfingerprintingpooloncultivaridentification,cultivarprotection,cultivardetectionetalaizevarietiesresearch.Keyolecularmarker;maize;DNAfingerprintingdatabase;application玉米是一種重要的飼用、糧用和工業(yè)加工作物,在國民經(jīng)濟(jì)中占有重要的地位。玉米育種方法的改進(jìn)對(duì)農(nóng)業(yè)發(fā)展具有重要意義。長(zhǎng)期以來,育種家們大多數(shù)是借
3、助易于鑒別的形態(tài)學(xué)和同工酶等遺傳標(biāo)記來輔助育種,并取得了很大成功。但這類標(biāo)記的最大不足之處在于其數(shù)量有限,.freelplesequencerepeat,SSR),又稱為微衛(wèi)星DNA(MicrosatelliteDNA)。微衛(wèi)星通常是指以2~4個(gè)核苷酸為單位多次串聯(lián)重復(fù)的DNA序列,也有少數(shù)以1~6個(gè)核苷酸為串聯(lián)重復(fù)單位。微衛(wèi)星在基因組中的分布是隨機(jī)的,它可以存在于內(nèi)含子、外顯子及染色體的其他任何區(qū)域。在不同植物中,微衛(wèi)星重復(fù)單位的堿基組成及拷貝數(shù)隨物種的不同而有所差異,但人們發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星兩端的序
4、列是保守的。因此,可以設(shè)計(jì)出與微衛(wèi)星兩端保守序列互補(bǔ)的引物,通過PCR擴(kuò)增重復(fù)序列本身并通過凝膠電泳檢測(cè)其多態(tài)性。SSR序列多態(tài)性的出現(xiàn)是由于同一物種中不同基因型的寡核苷酸重復(fù)次數(shù)不同以及重復(fù)序列在染色體復(fù)制時(shí)的滑動(dòng)或染色單體的不等交換造成的。因此,微衛(wèi)星可用作分子標(biāo)記。由于玉米中存在轉(zhuǎn)座子,微衛(wèi)星的多態(tài)性表現(xiàn)得極為豐富,所以,通過特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)、瓊脂糖凝膠電泳(或聚丙烯酰胺凝膠電泳)、放射自顯影(或銀染)和GeneScan技術(shù)等,就可以檢測(cè)到在簡(jiǎn)單重復(fù)序列重復(fù)單位數(shù)不同的DNA區(qū)
5、域的多態(tài)性,這也是SSR技術(shù)較其他幾種分子標(biāo)記技術(shù)更適合于玉米研究的原因之一。SSR技術(shù)推動(dòng)了玉米研究的發(fā)展。1.2SSR標(biāo)記的類型按照重復(fù)單位的堿基數(shù)可將微衛(wèi)星分為一至六核苷酸重復(fù)類型,其中二核苷酸重復(fù)有4種類型:(AT)n/(TA)n、(AG)n/(TC)n、(AC)n/(GT)n、(GC)n/(CG)n;三核苷酸重復(fù)有10種類型:(AAT)n/(TAT)n、(AAG)n/(TCT)n、(AAC)n/(TGT)n、(ATG)n/(TCA)n、(AGT)n/(TAC)n、(AGG)n/(TCC
6、)n、(AGC)n/(TGC)n、(ACG)n/(TCG)n、(ACC)n/(TGG)n、(GGC)n/(CGC)n;四核苷酸重復(fù)類型有32種(Jurke,1995)。所有類型的微衛(wèi)星中以單核苷酸重復(fù)和二核苷酸重復(fù)的微衛(wèi)星在基因組中出現(xiàn)的頻率最高。同一重復(fù)類型中不同的堿基重復(fù)多態(tài)性也不一致。另外,.北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社,2005.2王鳳格,趙久然,郭景倫,等.中國玉米新品種標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫構(gòu)建研究的幾點(diǎn)思考J.植物學(xué)通報(bào),2005(1):121-128.3郭景倫,趙久然,尉德銘,等.玉米單粒
7、種子DNA提取新方法J.北京農(nóng)業(yè)科學(xué),1997(2):2-3.4郭景倫,趙久然,王鳳格.適用于SSR分子標(biāo)記的玉米單粒種子DNA快速提取新方法J.玉米科學(xué),2005(2):16-17,25.5趙久然,郭景倫,郭強(qiáng),等.應(yīng)用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)我國骨干玉米自交系進(jìn)行類群劃分J.華北農(nóng)學(xué)報(bào),1999(1):32-37.6GRAHAMR,MICOLJ,MICOLJ,SPOONERDM,RODRIGUEZF,etal.Selectionofhighlyinformativeanduser-friend
8、lymicrosatellites(SSRs)forgenotypingofcultivatedpotatoJ.TheorApplGe,2004(108):881-890.14ZHANGLS,CLERCVL,LIS,etal.EstablishmentofaneffectivesetofsimplesequencerepeatmarkersforsunfloentJ.CanadianJournalofBotany,2005(1):66-72.15MACAULAYM,RAMSAYL,POative
