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1、DNA分子標記技術及其應用摘要：分子遺傳標記是近年來現(xiàn)代遺傳學發(fā)展較快的領域之一。木文系統(tǒng)闡述了DNA分子標記的概念，以及RFLP、RAPD、ALFP、STS、SSR和SNP為代表的分子標記技術的原理和主要方法，并簡單介紹了DNA分子標記技術的應用。最后探討了其進展以及存在的一些問題。分子標記;廢用分子遺傳標記技術作為一種新的分子標記技術，在分子生物學特別是在分子遺傳學的研宄中得到了廣泛的應用和發(fā)展，其所構逑的遺傳閣譜具有高度的特異性。與其它遺傳標記和比較，分子標記具有諸多優(yōu)點，如：遺傳穩(wěn)定，多態(tài)性高，多為共顯性，數(shù)量豐
2、富，遍及整個基因組，操作簡便。這些優(yōu)點使其廣泛地應用于生物基因組研究、進化分類、遺傳育種、醫(yī)學等方面，成為分子遺傳學和分子生物學研宄與應用的主流之一。IKra分子標記的概念遺傳標記是基因型特殊的易于識別的表現(xiàn)形式，在遺傳學的建立和發(fā)展過程中起著重要作用。從遺傳學的建立到現(xiàn)在，遺傳標記的發(fā)展主要經歷了4個階段，表現(xiàn)出丫4種類型：■形態(tài)標記（MorphologicalMarkers），指生物的外部特征待性_，包括質量性狀作遺傳標記和數(shù)量性狀作遺傳標記；2細胞標記（CytologicalMarkers）,主要指染色體組型和帶型
3、；3生化標記（BiochemicalMarkers）,指生物的生化特征特性，主要包括同工酶和貯藏蛋白兩種標記；4m分子標記（MolecularMarkers）是以生物大分子（主要是遺傳物質H）的多態(tài)性為基礎的一種遺傳標記。前3種標記是對基因的間接反映，而分子標記是瞧fik水平遺傳變異的直接反映。與其它遺傳標記相比較，分子標記具有諸多優(yōu)點，如：遺傳穩(wěn)定，多態(tài)性高，多為共顯性，數(shù)量豐富，遍及整個基因組，操作簡便。這些優(yōu)點使其廣泛地應用于生物基因組研宄、進化分類、遺傳育種、醫(yī)學等方面。目前，被廣泛應用的B/iX分子標記主要冇U
4、TLP（限制性片段長度多態(tài)性）、（隨機擴増多態(tài)性H）、iiUT（擴增片段長度多態(tài)性）、ns（序列標記位點）、ssu（簡單重復序列）和snp（單核苷酸多態(tài)性）等。2分子遺傳標記技術的種類2.IRFLP標記RFLPiRestrictionFragmentLengthPolymorphism,限制性片段長度多態(tài)性）標記，是人類遺傳學家Botstein等于R1?年捉出的，是以Southern雜交為核心的第一代分子標記技術。它是用限制性內切酶切割不同個體基因組ill后、用印跡轉移雜交的方法檢測同源序列酶切片段在長度上的差異。這種差
5、異是由于變異的產生或是由于單個堿基的突變所導致的限制性位點增加或消失，或是由于IfiX序列發(fā)生插入、缺失、倒位、易位等變化所引起的結構重排所致。其差異的檢測是利用標記的同源序列片段作探針進行分子雜交_，再通過放射自顯影＜或非同位素技術＞實現(xiàn)的。與傳統(tǒng)的遺傳標記相比，RFLP標記具有下列優(yōu)點：＜DRFLP標記無表型效應，其檢測不受外界條件、性別及發(fā)育階段的影響；ORFLP標記等位基因間是共顯性的.非等位基因間不存在上位效應，互不干擾；O＞RELP起源于基因組m的自然變異，這些變異在數(shù)量上幾乎不受限制，可以選取足夠數(shù)量能代表
6、整個棊因組的RFLP標記。IITLF標記正因為具有這些優(yōu)點，其特別適用于構建遺傳連鎖閣，在進行群體內和群體間的遺傳變異度分析、群體間基因流的評價以及譜系親緣關系分析時是強有力的工具。2.2RAPD技術RAPD（Randemamplifiedpolymorphic,RAPD是隨機擴增多態(tài)性標記，是由美國科學家等發(fā)展起來的，是以PCu為基礎的一項分子標記技術。它主要是以人工合成的隨機寡聚核苷酸序列為引物，通常為I?個堿棊，利用PCu技術隨機擴增基因組模板的不同位點，得到一系列多態(tài)性片段。擴增產物通過瓊脂糖凝膠電泳分離、經C
7、?染色后、即可進行多態(tài)性分析。RAPD標記與其它分子標記相比、其優(yōu)點主要表現(xiàn)在技術可以在對物種缺乏分子生物學研究資料的情況下，對其進行多態(tài)性分析；（2）uT?引物可用于不同生物基因組多態(tài)性的研宂。因此，引物可以在規(guī)模生產形成商品，這大大降低了研宄費用。標記也有不足的一面，它為顯性標記，檢測的變異來源不氣也不能判斷多態(tài)的H片段為純合子還是雜合子■此外標記的重復性常受實驗條件的影響。2.3AFLP技術擴塘片段長度多態(tài)性（AmplifiedFragmentLengthPolymorphism,AFLP）標記是Zabeau等于1
8、992年發(fā)明的一項專利技術。它是以PCR為基礎的RFLP技術，基因組DNA經2個限制性內切酶酶切后（通常一個酶切點數(shù)多，另一個酶切點數(shù)較少），與特定接頭相連接，根據(jù)接頭的核苷酸序列和酶切位點設計引物，進行特異性PCR擴增，最后分離擴增的DNA片斷。AFLP既具有快速高效的特點，又具有UTLP穩(wěn)定可靠、重復性好的特點，
