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1、銀杏葉提取物對荷瘤小鼠免疫功能的影響【摘要】目的通過藥理實驗證明，銀杏葉提取物對荷瘤小鼠免疫功能的影響，從而說明銀杏葉提取物能提高機體的免疫功能。方法通過對荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、淋巴細胞轉(zhuǎn)移功能、NK細胞活性、TNF活性、IL-2誘生水平等免疫指標的測定，從而得出銀杏葉提取物對機體免疫功能的影響。結(jié)果證明銀杏葉提取物具有增強機體的免疫功能的作用。結(jié)論銀杏葉提取物可顯著提高荷瘤小鼠的淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能；低劑量可增強NK細胞活性；可顯著增強TNF活性，且具有劑量依賴性；可顯著增強IL-2的誘生水平，且具有劑量依賴性【關
2、鍵詞】銀杏葉提取物S180細胞血清藥理學殺傷細胞天然腫瘤壞死因子白介素2銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物銀杏（GinkgkobilobaL）的葉子。秋季采集，曬干。氣微，味微苦。歸心、肺經(jīng)。傳統(tǒng)上用于治療冠心病、心絞痛、高血脂等癥。主要化學成分為黃酮類、內(nèi)酯類化合物。近幾年研究報道銀杏葉提取物不但具有擴張血管的作用，還有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗衰老、降血脂、抗腫瘤作用，許多醫(yī)藥學古籍記載了銀杏葉具有治療膀胱腫瘤和消化道腫瘤的作用。民間就有食用銀杏葉治療癌癥的做法。本組用荷瘤小鼠做實驗，探討銀杏葉提取物對機體免疫功能的影響及其作
3、用機制。1儀器與材料光學顯微鏡：日本Olympus；高速離心機：日本SAKURA；電磁攪拌機：日本SAKURA；電子天平：沈陽龍騰稱量儀器有限公司；CO2孵箱：美國Backtel型號I-1640培養(yǎng)基：美國GIBCO公司；S180細胞：延邊大學藥學院藥理教研室；昆明種小白鼠（體重18～22g，雌雄各半，普通級）：延邊大學藥學院實驗動物中心；新生小牛血清：北京鼎國生物技術有限公司；二甲基亞砜（DMSO）：Sigma公司；刀豆蛋白A（ConA）：Sigma公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）：Genviel浸泡過夜，再
4、加熱至60℃，溫浸5h，倒出提取液，再加入95%乙醇10000ml重復提取一次，然后再用70%乙醇10000ml煮沸一次，保持沸騰約2h，將三次提取所得浸出液合并后減壓濃縮，得棕綠色黏稠液狀的總浸膏?？偨嗉舆m量水溶解，分別以石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取。每溶劑萃取4次，每次1000ml。分別得石油醚萃取物0.242kg，氯仿萃取物0.324kg，乙酸乙酯萃取物0.331kg。取乙酸乙酯萃取物溶解后上硅膠柱，以氯仿-甲醇（4∶1）洗脫，分別收集綠色、黃綠色、紅色、棕色和褐色五條色帶的流份做初步的細胞毒性實驗，結(jié)
5、果以紅色流份的抑制細胞增殖效果最為明顯，因此將紅色流份作為本實驗的有效成分，將其收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中蒸干，過濾除菌，備用。22小鼠胸腺指數(shù)的測定［1］將小鼠處死，取胸腺稱重，計算胸腺指數(shù)。23小鼠脾細胞懸液的制備［2］將小鼠處死，取脾臟，研磨，沙網(wǎng)過濾（200目），加入紅細胞裂解液，裂解3min，1500r/min離心8min，取出淋巴細胞，生理鹽水沖洗2次，作者單位：1134300吉林白山，白山市食品藥品檢驗所2134300吉林白山，白山市中心醫(yī)院800r/min離心10min，用RPMI-1640培養(yǎng)液
6、調(diào)細胞濃度為5×106/ml，37℃5%CO2飽和濕度培養(yǎng)，備用。24淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能的測定［2］將制備的小鼠脾細胞懸液用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為5×106/ml，加入于96孔培養(yǎng)板，100μl細胞懸液/孔。加入濃度為2.5μl/ml的ConA，100μl/孔，于37℃5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h后，棄上清，每孔加入MTT（5mg/ml）試液10μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入DMSO100μl，振蕩10min，用酶聯(lián)免疫檢測儀測在570nm處測吸收度。25NK細胞活性
7、的測定［3］采用MTT方法測定，將制備的脾細胞懸液調(diào)濃度為3.1×106/ml。取傳代兩次且生長良好的靶細胞Yac-1，用培養(yǎng)液調(diào)濃度為1.4×105/ml，使得效應細胞和靶細胞的比例為25∶1。將兩種細胞接種于96孔培養(yǎng)板，每只小鼠脾細胞懸液均設3孔，其中2孔加入效應細胞和靶細胞，各100μl，另1孔為效應細胞對照，加入效應細胞和RPMI-1640（含10%小牛血清）各100μl。整批實驗還設3孔靶細胞對照，加入靶細胞和RPMI-1640各100μl。上述各孔于37℃5%CO2條件殺傷4h后，棄上清，每孔加
8、入MTT（5mg/ml）試液10μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入DMSO100μl，振蕩10min，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm處測吸收度。26TNF活性測定［4］261TNF的誘生將制備的小鼠脾細胞懸液用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為1×106/ml，接種于24孔培養(yǎng)板，每孔500μl，每孔再加終濃度為5μg/ml的ConA，500μl/孔，37℃5%CO2培養(yǎng)
