貫葉連翹中金絲桃素提取分離工藝的研究

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1、貫葉連翹中金絲桃素提取分離工藝的研究作者：程力惠，王建壯，李曉蒙【摘要】目的探討從貫葉連翹中提取分離金絲桃素的工藝。方法用乙醇從貫葉連翹中提取金絲桃素，再用S898吸附樹脂結(jié)合硅膠柱層析分離純化金絲桃素粗提物。結(jié)果該產(chǎn)品中金絲挑素的含量高達2.17％。結(jié)論該方法操作簡單，消耗低，產(chǎn)品中金絲桃素含量高?！娟P(guān)鍵詞】貫葉連翹；提??；分離；金絲桃素　　貫葉連翹HypericumperforatumL.是藤黃科金絲桃屬(Hypericum)植物貫葉連翹的全草。具有清熱解毒、收斂止血、利濕等功效。金絲桃素(Hypericin)是貫葉連翹中

2、最具有生物活性的物質(zhì)。近年來的研究表明，金絲桃素具有抗抑郁、抗菌消炎、抗DNA和RNA病毒，促進記憶等藥理活性［1］。　　我國貫葉連翹資源豐富，但由于貫葉連翹全草中所含的金桃素僅有萬分之幾，所以只有通過化學(xué)方法對其進行提取和精制，才能達到國際市場對貫葉連翹提取物中金絲桃素的含量大于0.3％的要求。本實驗對金絲桃素的提取、分離、純化的工藝進行探討，以提高產(chǎn)品中金絲桃素的含量?！　?儀器與試藥　　1.1儀器HP8453UV-Vis吸收光譜儀(美國惠普公司)，RE－52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，，HHS21-N電熱恒溫水浴鍋?！　?.2試藥薄層

3、層析硅膠G(青島海洋化工有限公司)，乙醚、乙醇、甲醇、醋酸乙酯乙醚為分析純。金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)樣品(購自美國Sigma公司，含量為85％)。貫葉連翹（產(chǎn)地為甘肅）?！　?方法與結(jié)果　　2.1金絲桃素的提取　　2.1.1預(yù)處理精確稱取粉碎的貫葉連翹75g。裝入滲轆柱中，分批加乙醚進行滲漉，前1～4次分別加乙醚150，125，100，75ml合并滲漉液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醚，即得除去葉綠紊等脂溶性物質(zhì)的貫葉連翹?！　?.1.2提取將乙醚處理過的貫葉連翹藥粉裝裝入圓底燒瓶中，加乙醇200ml，在50℃的水浴鍋中熱浸提取2h后取出，冷卻，過

4、濾，濾液備用。　　2.1.3TLC鑒定分別取濾液和金絲桃素對照品的乙醇液，點在薄層板上，在254nm的紫外燈下觀察，均呈橙紅色的熒光斑點，且二者的Rf值相同?！　?.1.4進一步提取反復(fù)熱浸提取，直到濾液經(jīng)薄層層析檢測不到橙紅色的熒光斑點為止，合并濾液，減壓濃縮為浸膏，然后將浸膏置于50～60℃的熱水中。用醋酸乙酯萃取，再將醋酸乙酯萃取物減壓蒸餾，即得到金絲桃素粗提物?！　?.2金絲桃素粗提物的分離工藝　　2.2.1樹脂處理取1000gS898吸附樹脂，加水浸泡48h，用蒸餾反復(fù)清洗干凈。加入3倍量的2mol/LNaOH溶液，

5、浸泡5h，用蒸餾水洗至中性；加入3倍量的4mol/LHCl，浸泡8h，用蒸餾水洗至近中性；加入60％乙醇浸泡10h，再用蒸餾水反復(fù)清洗至無乙醇?xì)馕叮詈笥谜麴s水浸泡待用［2］?！　?.2.2金絲桃素的分離工藝稱取20.0g金絲桃素粗品，用500ml60％乙醇溶解，在50℃的水浴中提取2h，過濾；濾液上S898吸附樹脂，然后用無水乙醇洗脫，收集流出液，在真空度為0.08mPa，溫度為60℃的水浴條件下濃縮3.5h，并在60℃的干燥箱中烘干。再將其用200ml丙酮溶解，過濾，濾液上硅膠柱。收集流出液，濃縮干燥后得紅色的金絲桃素產(chǎn)品

6、?！　?.2.3總金絲桃素含量測定將上述產(chǎn)品加入200ml甲醇中充分溶解，過濾，棄去殘渣。取5ml濾液放入容量瓶中，用甲醇定容至100ml。以甲醇為空白，用HP8452UVVis吸收光譜儀測定，取589nm處吸光度，按下列公式［3］：　　總金絲桃素的質(zhì)量含量＝（A589×600）/（樣品質(zhì)量×870）進行計算。每份樣品平行測定3次，取平均值。結(jié)果見表1?！　”?總金絲桃素含量測定結(jié)果（略）　　3討論　　經(jīng)過提取和進一步提取兩步，即得到除去脂溶性和水溶性雜質(zhì)的金絲桃素粗提物。　　乙醇濃度、浸提時間均會對貫葉連翹中金絲桃素的提取

7、率和提取物中金絲桃素的含量有影響，這將另文討論。　　金絲桃素對光和熱不穩(wěn)定，因此，在提取、分離、純化和精制金絲桃素的整個工藝中，每一個環(huán)節(jié)應(yīng)始終將溫度控制在60℃以下且金絲桃素應(yīng)避光保存于棕色瓶中。【參考