高生物活性復(fù)合人工骨修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究

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1、高生物活性復(fù)合人工骨修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究-->高生物活性復(fù)合人工骨修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[摘要]目的:探討載有轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)論文代寫生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1),具有高生物活性復(fù)合人工骨修復(fù)骨缺損的價(jià)值。方法:建立SD大鼠下頜骨缺損模型。采用組織學(xué)和分子生物學(xué)SlotBlot雜交法,檢測(cè)羥基磷灰石復(fù)合TGF-β1實(shí)驗(yàn)組,單純羥基磷灰石對(duì)照組,無材料修復(fù)的空白對(duì)照組在骨缺損愈合過程中的組織學(xué)及Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)狀況。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組的新骨形成及Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)水平最高。結(jié)論:提示載有TGF-β1的高生物活性復(fù)合人工骨局部使用能促進(jìn)骨愈合。[關(guān)鍵詞]下頜骨/

2、外科學(xué);羥基磷灰石類;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)β因子;膠原;基因表達(dá);骨再生;大鼠[Abstract]Objective:Toassesethevalueandclinicalsignificanceofbioactivematerial-hydroxyapatite(HA)binedaterial-HAgranules-binedodel.TheresultsonstratedthehighestleveloftypeⅠcollagenmRNAduringhealingperiod.Conclusion:Thebioactivematerial-HA-binedin

3、ggroa公司)液中浸泡吸附。1.2骨缺損模型建立及實(shí)驗(yàn)分組選用SD大鼠68只(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),雌雄各半,6~7周齡,體重180~250g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按1g/kg1%戊巴比妥注入腹腔麻醉,無菌條件下,采用下頜下切口暴露下頜骨,分別在雙側(cè)下頜骨體部形成2mm×6mm×2mm箱狀骨缺損區(qū),生理鹽水沖洗,然后,按組植入材料,分為羥基磷灰石復(fù)合TGF-β1組(A組,28只),單純羥基磷灰石組(B組,28只),不植入任何材料為空白對(duì)照組(C組,12只)。A、B2002年JOURNALOFZHEJIANGUNIVERSITY(MEDICALSCIE

4、NCES)Vol31No12002兩組植入材料后,壓實(shí)并用耳腦膠固定,C組分層縫合切口。術(shù)后肌注青霉素每日8萬U3d。A、B兩組分別于移植后1、2、4、8周取標(biāo)本分4組,每組7只,另外,C組也按上述時(shí)間段分4組,每組3只。1.3探針RatⅠ型膠原DIG標(biāo)記的寡核甘酸探針[2,3],α1:5′GCCGTCTTCAGAGCTGTAAACGTGGAAGCAAGGAGTCCC-3′,上海生工生物公司提供;Ratβ-actin1:5′CAGAAGGACTCCTACGTG3′,Ratβ-actin2:5′GCTCGGTCAGGATCTTCATG3′,由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)

5、院傳染病研究所合成。1.4標(biāo)本處理及組織學(xué)觀察分別于術(shù)后1、2、4、8周處死動(dòng)物,取下頜骨,切割骨缺損區(qū)外周1mm的骨組織標(biāo)本,一半標(biāo)本保存于-80℃,取出另一半經(jīng)4%多聚甲醛固定,0.5molEDTA脫鈣,石蠟包埋切片,HE染色,光鏡下觀察。1.5SlotBlot雜交方法按文獻(xiàn)[4],骨缺損區(qū)總RNA樣本提取后,變性并于尼龍膜點(diǎn)樣,裝入RP648點(diǎn)樣儀加樣抽吸,80℃干烤;42℃預(yù)雜交;加入Dig標(biāo)記的寡核苷酸Ⅰ型膠原探針[3],42℃雜交,膜于2×SSC/0.1%SDS,0.2×SSC/0.1%SDS漂洗;經(jīng)bufferⅠ洗膜2min,buffer

6、Ⅱ封閉30min,bufferⅠ洗膜2min,bufferⅠ稀釋;anti-Dig-Ap反應(yīng)1h,bufferⅠ洗膜10min×3次;bufferⅢ平衡5min,NBT、bufferⅢ顯色,避光反應(yīng),TE終止。雜交結(jié)束。雜交膜經(jīng)光密度掃描,數(shù)據(jù)單位以每毫米面積的光密度比值表示。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS-PC軟件包,數(shù)值以x-±s表示,表1用多組方差分析后行q檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1組織學(xué)觀察1周時(shí)A組、B組及C組缺損區(qū)均可見炎癥反應(yīng),中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),A、B組材料組織界面有纖維組織長(zhǎng)入,無骨形成;2周后A、B組HA微粒間及C組可見炎癥細(xì)胞中度浸潤(rùn),材料骨界

7、面A組近骨壁處可見少量新骨形成,部分區(qū)域可見纖維樣組織存在,B、C組未見新骨形成;4周后,A組、B組及C組局部炎癥反應(yīng)明顯減退,A組材料骨界面近骨壁處新骨形成較多,近材料區(qū)纖維組織減少,B組新骨形成少于A組,C組部分新骨形成,缺損區(qū)域減少,骨組織邊界不明顯;8周時(shí),可見B組材料骨界面纖維組織減少,新生骨增多,A組材料顆粒間被大量新生骨充滿(圖1),C組缺損區(qū)域減少。箭頭所指為材料骨界面區(qū)圖1A組8周時(shí)HA復(fù)合TGF-β1組材料顆粒間被大量新生骨充滿(HE10×10)Fig.1IngroupA,newbonefilledwithHAgrainin8wee

8、ks2.2SlotBlot雜交表1示-->A、B、C三組Ⅰ型膠原的mRNA表達(dá)水平比較有顯著差