雪靈芝提取物總黃酮測(cè)定及對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用

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1、雪靈芝提取物總黃酮測(cè)定及對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用作者:龔受基,姜翠霞,李騰飛,周以智,段小群,徐慶【摘要】  目的用分光光度法對(duì)雪靈芝提取物總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定,探討雪靈芝有效部位對(duì)小鼠疼痛的鎮(zhèn)痛作用。方法采用Na(NO2)2-AlCl3法測(cè)定雪靈芝有效部位總黃酮含量;用熱板法、醋酸致痛法觀察藥物對(duì)致痛小鼠反應(yīng)的影響。結(jié)果C012部位總黃酮含量為59.16%,C013部位總黃酮含量為56.86%;C012和C013兩部位對(duì)熱板法致痛具有較好的鎮(zhèn)痛作用,C012部位200mg/kg劑量鎮(zhèn)痛效果顯著,其0.5h和2.0hP<

2、0.001,4.0hP<0.01,1.0hP<0.05;100mg/kg在0.5h有很好的鎮(zhèn)痛效果(P<0.01);C013部位200mg/kg在2.0,4.0h鎮(zhèn)痛效果好(P分別為0.001和0.01),在0.5hP<0.05;劑量100mg/kg在4.0h具有較好的鎮(zhèn)痛效果(P<0.05)。C012部位對(duì)醋酸致痛在100mg/kg劑量時(shí)具有很好的鎮(zhèn)痛效果(P<0.01),50mg/kg具有較好的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05)。結(jié)論雪靈芝C012和C013兩部位總黃酮含量較高,具有

3、顯著的鎮(zhèn)痛作用,其作用機(jī)制有外周和中樞參與。【關(guān)鍵詞】雪靈芝;鎮(zhèn)痛;機(jī)制雪靈芝系石竹科蚤綴屬植物(Arenaria.spp),多年生墊狀草本,分布于青藏高原海拔約5000m左右的永久雪線附近地帶?!恫厮幹尽酚浭鲅╈`芝性味功用“苦寒,清肺中之熱,止咳,降血壓,滋補(bǔ);治肺炎、淋病、淋巴結(jié)核、子宮病”。彭寶珠等[1~3]對(duì)雪靈芝的藥理藥效學(xué)進(jìn)行了研究。試驗(yàn)證明,雪靈芝提取物有抗炎、抗免疫、解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳祛痰、抗烏頭堿引起的心律失常作用、抗缺氧和降血壓作用,對(duì)酒精性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用,并能夠增強(qiáng)免疫功能,對(duì)腫瘤具有抑制作

4、用。雪靈芝是一種能提高綜合免疫能力的傳統(tǒng)藥物,其藥用價(jià)值有進(jìn)一步研究的必要。研究表明[4],蚤綴中含有氨基酸、糖類、生物堿、黃酮苷、皂苷及香豆素等多種成分。本研究對(duì)雪靈芝的提取物進(jìn)行了分離,得到了鎮(zhèn)痛有效部位,利用分光光度法對(duì)兩個(gè)部位進(jìn)行了總黃酮含量的測(cè)定,并其鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了研究。  1材料  1.1藥物與試劑阿司匹林,羅痛定注射液(廣東省博羅先鋒藥業(yè)集團(tuán)有限公司,批號(hào):070904),羅痛定片(成都市湔江制藥廠,070603);蘆丁對(duì)照品(南京替斯艾么中藥技術(shù)研究所,批號(hào):TCM027-080118);亞硝酸鈉、氯化

5、鋁、乙醇、冰醋酸、氫氧化鈉均為普通市售分析純?cè)噭?;雪靈芝采自西藏自治區(qū)?! ?.2動(dòng)物昆明種小鼠,雌雄不論,體質(zhì)量18~22g,潔凈級(jí),由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào):2005A033號(hào)?! ?方法  2.1分光光度法測(cè)定總黃酮含量[5]雪靈芝藥材采自西藏自治區(qū),經(jīng)廣西植物研究所高級(jí)工程師黃定中鑒定為雪靈芝ArenariakansuensisMaxim。雪靈芝全草用水提取,水提液上D101大孔樹脂,以蒸餾水洗脫至無色;以30%乙醇洗脫,收集洗脫液,濃縮干燥,得C012;60%乙醇洗脫,收集洗脫液,濃縮干燥

6、,得C013。精確稱取20.0mg蘆丁對(duì)照品,以60%乙醇溶液超聲溶解并定容至100ml,分別移取上述蘆丁儲(chǔ)備液0,1.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00ml于7個(gè)25ml量瓶中,加入0.50mol/L的亞硝酸鈉溶液1.0ml,搖勻靜置5min后,加入0.30mol/L氯化鋁溶液1.00ml,搖勻靜置5min后,加入1.00mol/L氫氧化鈉溶液5.0ml,用60%乙醇水溶液定容至刻度。取蘆丁溶液在波長360~600nm區(qū)間掃描,確定最大吸收波長為505nm。取不同濃度蘆丁溶液于波長505nm處比

7、色測(cè)定吸光值,試劑空白參比,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性回歸分析得標(biāo)準(zhǔn)回歸方程:A=2.3535C-0.03712,回歸系數(shù)r=0.9933。分別精密稱取樣品C012:0.3005g,樣品C013:0.3009g,用60%乙醇溶解并定容到50ml的容量瓶中,再各取兩樣品溶液2ml于50ml的容量瓶中,定容。參照上述方法,吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液或樣品溶液,進(jìn)行精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和回收率實(shí)驗(yàn)[6]?! ?.2鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)方法[7]  2.2.1熱板法  雌性小鼠,放在(55±0.5)℃的金屬熱板上,挑選痛閾值在5~30s的小鼠,根據(jù)痛閾值隨

8、機(jī)分生理鹽水組、陽性藥物組和測(cè)試藥物高、中、低劑量組,每組10只,各組均ig給藥(0.2ml/10g),1次/d,連續(xù)7d。末次給藥后不同時(shí)間分別再測(cè)痛閾,以藥后痛閾的提高值為指標(biāo),進(jìn)行組間比較。  2.2.2對(duì)醋酸引起的小鼠扭體鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)取昆明種小鼠80只,隨機(jī)分成8組,即生理鹽水組,阿司匹林組(200mg/kg),C012高、中

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