化學發(fā)光檢測

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1、WORD格式可編輯第一章化學發(fā)光技術(shù)一、免疫學檢測發(fā)展階段免疫學檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進行檢測的一種手段，由于其可以利用同位素、酶、化學發(fā)光物質(zhì)等對檢測信號進行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)。我國免疫學的檢測基本歷經(jīng)了以下幾個過程，如圖1.1所示?；瘜W發(fā)光免疫檢測（CLIA）酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）放射免疫檢測（RIA）20世紀60年代70年代90年代時間圖1.1免疫學檢測發(fā)展階段盡管免疫診斷在臨床診斷中占據(jù)著非常重要的地位，但是從我國臨床免疫診斷現(xiàn)狀來看，無論是臨床應(yīng)用方面，還是產(chǎn)業(yè)化角度，都處于相對比較落后的狀

2、態(tài)，亟待改進。下表１.１就此做一比較：表1.1中國免疫診斷現(xiàn)狀中國國際（歐美為主）放射免疫法　?。ǎ遥桑粒d起于20世紀70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院；．產(chǎn)品處于衰退期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。．興起于20世紀60年代，現(xiàn)已基本退出臨床應(yīng)用；．產(chǎn)品生命周期已終結(jié)；．廠商試劑和儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。酶聯(lián)免疫法　　（ＥＬＩＳＡ）．興起于20世紀80年代，現(xiàn)普遍使用于各級臨床機構(gòu)，為我國臨床免疫診斷的基本方法；．產(chǎn)品處于成熟期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑尚未系列化。．興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用；．產(chǎn)品處于衰

3、退期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化?；瘜W發(fā)光免疫法（ＣＬＩＡ）．導入于20世紀90年代，現(xiàn)個別較大醫(yī)院開展個別項目；．產(chǎn)品處于導入期或成長期；．無廠商開發(fā)生產(chǎn)，完全依賴進口。．興起于20世紀80年代，現(xiàn)已被臨床普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱方法；．產(chǎn)品處于成熟期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，儀器自動化程度高，試劑系列化狀態(tài)好。專業(yè)知識整理分享WORD格式可編輯由以上分析不難看出，化學發(fā)光免疫檢測是大勢所趨；而取代進口，發(fā)展我國的化學發(fā)光檢測事業(yè)，正是臨床檢驗界著手發(fā)展的方向。由此，我公司自1998年立項至今，致利于化學發(fā)光檢測方案設(shè)計，自

4、行開發(fā)了具有國內(nèi)領(lǐng)先水平的化學發(fā)光底物，與國外知名檢測儀器生產(chǎn)商聯(lián)合開發(fā)了化學發(fā)光全自動、半自動檢測儀，并自行設(shè)計開發(fā)了化學發(fā)光管理軟件，而今形成了儀器、試劑、軟件全面配套，為我國的臨床檢驗界提供了一套完善的解決方案。一、化學發(fā)光免疫分析技術(shù)【概述】本世紀70年代中期Arakawe首次報道用發(fā)光信號進行酶免疫分析，利用發(fā)光的化學反應(yīng)分析超微量物質(zhì)，特別是用于臨床免疫分析中檢驗超微量活性物質(zhì)。目前，這一技術(shù)已從實驗室的稀有技術(shù)過渡到臨床醫(yī)學的常規(guī)檢測手段?；瘜W發(fā)光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是將化學發(fā)光

5、或生物發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術(shù)。其檢測原理與放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同這處是以發(fā)光物質(zhì)代替放射性核素或酶作為標記物，并藉助其自身的發(fā)光強度直接進行測定?；瘜W發(fā)光免疫分析既具有放射免疫的高靈敏度，又具有酶聯(lián)免疫的操作簡便、快速的特點，易于標準化操作。且測試中不使用有害的試劑，試劑保持期長，應(yīng)用于生物學、醫(yī)學研究和臨床實驗診斷工作，成為非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。【原理】在化學發(fā)光免疫分析中包含兩個部分，即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學發(fā)光系統(tǒng)。免疫反應(yīng)系統(tǒng)，其基本原理同酶聯(lián)免疫技術(shù)（

6、ELISA），常采用雙抗體夾心法、競爭法、間接法等反應(yīng)模式，如圖1.2，1.3，1.4所示。如圖1.2雙抗體夾心法反應(yīng)原理示意圖專業(yè)知識整理分享WORD格式可編輯化學發(fā)光系統(tǒng)的原理在于免疫反應(yīng)中的酶作用于發(fā)光底物。發(fā)光底物在酶的作用下，底物發(fā)生化學反應(yīng)并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體，當其回到穩(wěn)定的基態(tài)時，可同時發(fā)射出光子。利用發(fā)光信號測量儀器即可測量光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與樣品中的待測物質(zhì)的量成正比。由此可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質(zhì)的含量。具體說來，我們采用的是辣根過氧化物酶（HRP）催化魯米諾（Luminol）底

7、物發(fā)光系統(tǒng)，如圖1.5所示。我們的核心技術(shù)之一在于自行研制開發(fā)的發(fā)光底物系統(tǒng)，該系統(tǒng)與國外同類產(chǎn)品的比較表明，不僅主要性能指標達到了國外產(chǎn)品水平，并且由于自行生產(chǎn)，因此大大降低了發(fā)光底物的成本。在該底物系統(tǒng)中，我們采用特殊的復合型增強劑，發(fā)光快，強度高，發(fā)光平臺期長，可達30~60分鐘，因此完全可以滿足臨床檢測的需要。其發(fā)光平臺期測定結(jié)果如圖1.6所示（1）與放免（RIA）產(chǎn)品比較　　與放射免疫試劑（RIA）比較，化學發(fā)光避免了放射性核素的污染以及對操作人員的傷害，大大縮短了反應(yīng)時間，同時兼具高靈敏度的優(yōu)勢。（2）與酶免（ELISA）產(chǎn)品比較靈敏度與

8、可測范圍遠遠高于酶免產(chǎn)品，兼具ELISA法簡便的操作方法與較短的反應(yīng)時間。（3）與進口全自動發(fā)光比較試劑成本