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《環(huán)孢素a對咖啡因間歇刺激下的l6細胞肌原纖維降解信號通路的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、DissertationSubmittedtoGuangzhouSportUniversityforMasterDegreeEffectsofcyclosporineAonthemyofibrillardegradationsignalingpathwayintheintermittentcaffeine-stimulatedL6cellsMasterCandidate:YangMingSupervisor:Liaoba-genJune,2011廣州體育學院學位論文使用授權聲明本人完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：研
2、究生在校攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權單位屬廣州體育學院。廣州體育學院擁有在著作權法規(guī)定范圍內(nèi)學位論文的使用權，包括：（1）已獲學位的研究生必須按學校規(guī)定提交學位論文，學?？梢圆捎糜坝 ⒖s印或其他復制手段保存研究生上交的學位論文；（2）為教學和科研目的，學?？梢詫⒐_的學位論文作為資料在圖書館、資料室等場所供校內(nèi)師生閱讀，或在校園網(wǎng)上供校內(nèi)師生瀏覽部分內(nèi)容；（3）學校有權向國家主管部門或其指定機構送交論文的電子版或紙質版，允許學位論文被檢索、查閱和借閱。本人保證遵守上述規(guī)定。（保密的論文在解密后遵守此規(guī)定）作者簽名：導師簽名：日
3、期：日期：廣州體育學院學位論文聲明本人鄭重聲明：本人所呈交《環(huán)孢素A對咖啡因間歇刺激下的L6細胞肌原纖維降解途徑的影響》是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。作者簽名：導師簽名：日期：日期：摘要目的：本研究通過使用環(huán)孢素A抑制對大鼠L6肌管細胞鈣調神經(jīng)磷酸酶的活性，同時使用咖啡因模擬運動時骨骼肌細胞內(nèi)的環(huán)境，觀察環(huán)孢素A
4、對泛素-蛋白酶體系統(tǒng)信號的影響，探討鈣調神經(jīng)磷酸酶是否影響正常狀況以及運動時骨骼肌萎縮信號轉導通路。研究方法：L6細胞分化8天后形成肌管細胞，然后隨機分為四組：對照組，咖啡因組，環(huán)孢素A組，咖啡因+環(huán)孢素A組。每天藥物刺激5小時，連續(xù)刺激5天。分別提取蛋白質和核酸，并將全部蛋白和mRNA樣品分別調為同一濃度。然后熒光實時定量PCR檢測FoxO1、MAFbx以及MuRF1的基因表達；Westernblotting檢測FoxO1、MAFbx、MuRF1、20S蛋白含量；熒光定量法檢測20S蛋白酶和鈣蛋白酶的活性。研究結果：1.形態(tài)學
5、改變：未分化前，L6細胞成單核梭形。分化后變成多核線性的肌管細胞。經(jīng)過5天的實驗干預，加環(huán)孢素A的兩組細胞大小明顯小于另外兩組，且咖啡因間歇刺激可以抵抗CsA誘導的肌管細胞萎縮。2.熒光實時定量PCR結果：慢性間歇刺激下，加咖啡因的兩組FoxO1mRNA表達下調；MuRF1和MAFbx兩個基因的表達在各組之間無差異。環(huán)孢素A并不影響它們的表達。3.Westernblotting結果:慢性間歇咖啡因/環(huán)孢素A刺激下,FoxO1/MuRF1/MAFbx和20S蛋白酶蛋白含量各組之間均無顯著性差異。4.熒光定量酶活性檢測結果：環(huán)孢素組
6、、環(huán)孢素A+咖啡因組胞漿鈣蛋白酶活性均明顯低于其余兩組；與環(huán)孢素組相比，環(huán)孢素A+咖啡因組鈣蛋白酶活性則明顯上調；胞漿20S蛋白酶的活性各組之間均無顯著性差異。結論：1.間歇咖啡因刺激明顯抑制L6細胞FoxO1基因表達，但不影響MuRF1和MAFbx的表達。2.環(huán)孢素A對L6細胞泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的相關信號分子無影響，即鈣調神經(jīng)磷酸酶不影響泛素-蛋白酶體系統(tǒng)。3.環(huán)孢素A抑制L6細胞鈣蛋白酶活性，間歇咖啡因刺激減輕其抑制。關鍵詞：L6細胞；泛素-蛋白酶體；咖啡因；環(huán)孢素A；鈣蛋白酶IABSTRACTObjective:Thiss
7、tudyisbasedontheL6myotubeswhichweretreatedwithcyclosporineAtoinhibitcalcineurinactivity,atthesametime,thecaffeinewasusedtokeepasimilarcellularenvironmentduringexercise.Thus,theeffectofcyclosporinAontheUbiquitin-Proteasomesystemsignalswasobservedtodeterminewhethercalc
8、ineurininvolvedinskeletalmuscleatrophysignalingpathwaysduringnormalandexerciseconditions.Methods:AfterL6cellsturnedtomyotubesthroug
