酒泉嘉峪關(guān)地區(qū)地膜洋蔥根腐病病原菌研究

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1、酒泉嘉峪關(guān)地區(qū)地膜洋蔥根腐病病原菌研究【摘要】應(yīng)用柯赫氏證病法則對(duì)地處甘肅省河西走廊西段酒泉、嘉峪關(guān)發(fā)生的地膜洋蔥根腐病病原進(jìn)行了研究。對(duì)病部組織分離培養(yǎng)的結(jié)果是鐮刀菌（Fusarium）占64.58%,交鏈胞（Alternaria）占14.58%,其它各類雜菌等菌落占20.84%；回接苗期和成株期洋蔥植株，鐮刀菌可重現(xiàn)根腐病癥狀，其它菌落均則難以重現(xiàn)。因此確認(rèn)，酒泉嘉峪關(guān)產(chǎn)區(qū)洋蔥根腐病的病原為鐮刀菌?！娟P(guān)鍵詞】酒泉地區(qū)；嘉峪關(guān)地區(qū)；地膜洋蔥根腐病;鐮刀菌；病原菌研究洋蔥根腐?。ㄞr(nóng)民俗稱脫底），是近年來

2、甘肅省酒泉、嘉峪關(guān)洋蔥產(chǎn)區(qū)突發(fā)的重大病害，其主要癥狀是自進(jìn)入5月初洋蔥葉片開始發(fā)黃，逐步表現(xiàn)外緣葉片枯萎、洋蔥鱗莖腐朽壞死；進(jìn)入7月下旬?8月上旬病害發(fā)生程度加劇，表現(xiàn)連片發(fā)黃枯死，用手輕拔即起，根盤腐朽、須根脫落；濕度大的有蠅蛆腐生。洋蔥一旦被感染發(fā)病則完全喪失商品價(jià)值。目前該病在酒泉嘉峪關(guān)的發(fā)病面積已涵蓋全部8000hm2洋蔥生產(chǎn)。其中普遍發(fā)病率在0.75%?4.9%之間，發(fā)病面積達(dá)5540hm2,占酒嘉地區(qū)洋蔥面積比重達(dá)69.28%,造成實(shí)際經(jīng)濟(jì)損失達(dá)536.28萬(wàn)元；重度病田發(fā)病率13.49%?

3、24.08%；特重病田發(fā)病率可達(dá)78%,基本絕收。和該病危害癥狀與發(fā)病規(guī)律相同的報(bào)道目前在國(guó)內(nèi)檢索文獻(xiàn)中尚屬未見；類似的報(bào)道有洋蔥干腐病，但除所描述鱗莖須根脫落癥狀和此病相似外，所述莖盤變色癥狀、附著粉紅色霉層的描述及所述病程、防治要點(diǎn)則和病區(qū)出現(xiàn)病害的基本特點(diǎn)完全不同。河西地區(qū)地處高原極旱荒漠灌溉農(nóng)業(yè)區(qū)，氣候類型和生產(chǎn)條件與國(guó)內(nèi)外其它洋蔥產(chǎn)區(qū)明顯不同；摸清本區(qū)域這一新發(fā)洋蔥根腐病的病原，對(duì)下一步研究確定該病害和國(guó)內(nèi)其它區(qū)域所述病害是否相同或?qū)儆谙嗤『Φ牡乩碜兎N，以及對(duì)開展洋蔥品種在洋蔥產(chǎn)區(qū)間的引種和

4、抗病品種選育、制定相應(yīng)的大田防治規(guī)程都具有重要意義。1材料與方法1.1病原菌分離于2011年秋季在區(qū)域內(nèi)各生態(tài)點(diǎn)廣泛采集典型發(fā)病標(biāo)本40份，置于低溫庫(kù)備用。按經(jīng)典配方配制好PDA培養(yǎng)基，與清洗干凈的培養(yǎng)皿一起置高壓滅菌鍋（6.8kg、121°C）濕熱消毒30min；將標(biāo)本用清水淘洗干凈，切下病間組織，在無菌工作間將切制好的病樣標(biāo)本按常規(guī)措施消毒處理后置PDA平面培養(yǎng)基，后轉(zhuǎn)入恒溫培養(yǎng)箱（3（TC）培養(yǎng)4?7d,5d后統(tǒng)計(jì)出現(xiàn)的各類真菌、細(xì)菌菌落數(shù)。1.2致病性測(cè)定1.2.1病原菌實(shí)驗(yàn)室致病性測(cè)定于201

5、2年3月19日在無菌操作間將中度感病品種黃皮02洋蔥鱗莖削去基部莖盤，在削去部位打三角錐形小坑，用75%酒精表面消毒并用無菌水清洗干凈；將分離獲得經(jīng)過純化的不同病菌菌塊反接到洋蔥鱗莖莖盤三角坑內(nèi)，以無菌落生長(zhǎng)的PDA培養(yǎng)基接種做對(duì)照，用封口塑袋封口(留有氣孔)置恒溫箱培養(yǎng)7d,統(tǒng)計(jì)發(fā)病率。1.2.2田間柯赫氏證病法則鑒定(1)病原純化繁殖：將經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室測(cè)定對(duì)洋蔥有明顯毒性的病原鐮刀菌,和其它分離到的病菌分別用PDA純化后,定量轉(zhuǎn)接到250ml錐形瓶小麥粒培養(yǎng)料中，置2hC恒溫箱培養(yǎng)7d,期間翻轉(zhuǎn)搖晃接種

6、使菌絲在培養(yǎng)料中生長(zhǎng)均勻，后置冰箱保存?zhèn)溆茫?2)試驗(yàn)地消毒與規(guī)劃設(shè)計(jì)、田間接種。選擇向陽(yáng)溫室兩間，面積66.7^0,于2012年4月16日用棚膜密閉覆蓋地表，經(jīng)過50d太陽(yáng)強(qiáng)光照射高溫加熱土壤消毒處理，6月4日揭去棚膜泡好地，6月12日按小區(qū)面積0.2^0、5次重復(fù)設(shè)計(jì)劃好小區(qū)，小區(qū)間埋設(shè)地膜進(jìn)行隔離，將繁殖好的病原摻入各小區(qū)土壤，每個(gè)小區(qū)接種病原50g,對(duì)照小區(qū)接種煮熟麥粒。(3)播種與試驗(yàn)管理。選擇中感根腐病的洋蔥品種黃皮02飽滿種子，經(jīng)75%酒精常規(guī)消毒后用無菌水淘洗并保濕催芽，6月15日播入試

7、驗(yàn)小區(qū)，覆蓋經(jīng)過碾壓的軟草噴灑自來水保濕，苗出全后撤去軟草按正常洋蔥生產(chǎn)進(jìn)行管理，跟蹤觀察并記錄發(fā)病數(shù)據(jù)。1.3致病菌分類鑒定實(shí)驗(yàn)室和田間接種發(fā)病植株采集標(biāo)本再分離，鏡檢確定發(fā)病洋蔥分離獲得病原和接種病原一致后進(jìn)行病原菌分類地位鑒定。2試驗(yàn)結(jié)果與分析2.1病原菌分離結(jié)果采自酒泉、金塔、嘉峪關(guān)、玉門鎮(zhèn)病樣標(biāo)本40份，分離2批次共獲得480個(gè)菌落，其中目標(biāo)菌落鐮刀菌310個(gè)、占總數(shù)64.58%,為主體菌落；交鏈鞄菌落70個(gè)、占總數(shù)14.58%,為次主體菌落；雜菌細(xì)菌菌落30個(gè)、占總數(shù)6.25%,雜菌真菌菌落

8、70個(gè)、占總數(shù)14.58%O統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。2.2致病性測(cè)定結(jié)果2.2.1病原菌實(shí)驗(yàn)室致病性測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果鐮刀菌［Fusarium）對(duì)成品洋蔥有明顯的致病力。在無菌環(huán)境下3CTC恒溫培養(yǎng)結(jié)果，從接種至癥狀出現(xiàn)潛伏期6d,發(fā)病部位出現(xiàn)典型莖盤腐爛癥狀、著生白色菌絲，經(jīng)再分離獲得與原始病原培養(yǎng)性狀和顯微觀察性狀相一致的病菌。接種交鏈胞(Alternaria)＞細(xì)菌(Bacteria)、雜真菌(Penicilium、Pyzhium)對(duì)成品洋蔥均無明