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《pcr―熒光探針法檢測嚴(yán)重少精子癥或無精子癥患者y染色體微缺失的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、為了確?！敖虒W(xué)點(diǎn)數(shù)字教育資源全覆蓋”項(xiàng)目設(shè)備正常使用，我校做到安裝、教師培訓(xùn)同步進(jìn)行。設(shè)備安裝到位后，中心校組織各學(xué)點(diǎn)管理人員統(tǒng)一到縣教師進(jìn)修學(xué)校進(jìn)行培訓(xùn)，熟悉系統(tǒng)的使用和維護(hù)。PCR―熒光探針法檢測嚴(yán)重少精子癥或無精子癥患者Y染色體微缺失的研究 [摘要]目的：運(yùn)用基于8位點(diǎn)的PCR-熒光探針法檢測人Y染色體AZF區(qū)微缺失情況，分析其結(jié)果的可靠性并探討其對(duì)嚴(yán)重少精或無精癥患者的臨床意義。方法：隨機(jī)抽取150例嚴(yán)重少精或無精子癥患者的外周血，分別運(yùn)用PCR-熒光探針法和多重PCR凝膠電泳法進(jìn)行檢測Y染色體微缺失AZFa、AZFb、AZFc和AZ
2、Fd區(qū)共8個(gè)位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)其缺失情況，并分析兩方法檢驗(yàn)結(jié)果的一致性。結(jié)果：Y染色體微缺失總發(fā)生率為%，非梗阻性無精子癥組為%；嚴(yán)重少精子癥組為%，PCR-熒光探針法和PCR-電泳法檢測結(jié)果完全一致。結(jié)論：Y染色體AZF區(qū)與精子生成關(guān)系密切，嚴(yán)重少精子癥或非梗阻性無精子癥男性行輔助生殖技術(shù)前應(yīng)篩查其微缺失情況；PCR-熒光探針法檢測人Y染色體AZF區(qū)微缺失穩(wěn)定快捷，結(jié)果可靠?！ 關(guān)鍵詞]熒光定量PCR；Y染色體微缺失；男性不育 [中圖分類號(hào)]R698+.2[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A為了充分發(fā)揮“教學(xué)點(diǎn)數(shù)字教育資源全覆蓋”項(xiàng)目設(shè)備的作用，我們不僅把資源運(yùn)用于
3、課堂教學(xué)，還利用系統(tǒng)的特色欄目開展課外活動(dòng)，對(duì)學(xué)生進(jìn)行安全教育、健康教育、反邪教教育等豐富學(xué)生的課余文化生活。為了確保“教學(xué)點(diǎn)數(shù)字教育資源全覆蓋”項(xiàng)目設(shè)備正常使用，我校做到安裝、教師培訓(xùn)同步進(jìn)行。設(shè)備安裝到位后，中心校組織各學(xué)點(diǎn)管理人員統(tǒng)一到縣教師進(jìn)修學(xué)校進(jìn)行培訓(xùn)，熟悉系統(tǒng)的使用和維護(hù)?！ ∫鸦樵旋g夫婦中不孕不育癥的發(fā)病率約為15%，其中男性因素約占50%。由遺傳缺陷引起的精子發(fā)育障礙約占男性不育的30%以上，而Klinefelter綜合征與Y染色體微缺失是最主要的遺傳性因素。XX年我國男性生殖遺傳學(xué)檢查專家共識(shí)中指出，非梗阻性無精子癥及嚴(yán)重少
4、精子癥患者，建議進(jìn)行Y染色體微缺失檢測，這對(duì)男性生殖遺傳學(xué)臨床治療、提高輔助生殖技術(shù)的療效和安全性以及開展胚胎植入前遺傳學(xué)診斷等具有重要意義。 目前，Y染色體微缺失的檢測方法主要在PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上展開。國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室多依據(jù)歐洲男科學(xué)協(xié)會(huì)/歐洲分子遺傳試驗(yàn)質(zhì)控協(xié)作網(wǎng)提出的方案，采集外周血標(biāo)本進(jìn)行多重PCR凝膠電泳檢測。該技術(shù)耗時(shí)長、存在操作污染風(fēng)險(xiǎn)、結(jié)果判定主觀性較大，不太適應(yīng)目前臨床科室需要。本研究使用PCR-熒光探針法檢測150例非梗阻性無精子癥和嚴(yán)重少精患者的Y染色體AZF區(qū)8個(gè)位點(diǎn)的微缺失情況，比較其與傳統(tǒng)多重PCR凝膠電泳法所測結(jié)果
5、的優(yōu)劣，并探討不育男性Y染色體微缺失發(fā)生率及其與精子生成的關(guān)系。 1對(duì)象和方法 研究對(duì)象 連續(xù)收集我院生殖門診無精子癥及嚴(yán)重少精子癥患者150例，根據(jù)WHO人類精液檢驗(yàn)與處理實(shí)驗(yàn)室手冊檢測精液至少2次，無精子癥患者精液須離心鏡檢確診，并排除Klinefelter綜合征、小睪癥、梗阻性無精子癥、既往睪丸外傷、惡性腫瘤術(shù)后放化療、重度精索靜脈曲張及隱睪者。簽署知情同意書，采取其外周血并EDTA抗凝?！ ?shí)驗(yàn)方法為了充分發(fā)揮“教學(xué)點(diǎn)數(shù)字教育資源全覆蓋”項(xiàng)目設(shè)備的作用，我們不僅把資源運(yùn)用于課堂教學(xué)，還利用系統(tǒng)的特色欄目開展課外活動(dòng)，對(duì)學(xué)生進(jìn)行安全
6、教育、健康教育、反邪教教育等豐富學(xué)生的課余文化生活。為了確保“教學(xué)點(diǎn)數(shù)字教育資源全覆蓋”項(xiàng)目設(shè)備正常使用，我校做到安裝、教師培訓(xùn)同步進(jìn)行。設(shè)備安裝到位后，中心校組織各學(xué)點(diǎn)管理人員統(tǒng)一到縣教師進(jìn)修學(xué)校進(jìn)行培訓(xùn)，熟悉系統(tǒng)的使用和維護(hù)?！ 「鶕?jù)GenBank公布的STS位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增方法，將同一患者的兩份外周血標(biāo)本分別使用基于8位點(diǎn)的PCR-熒光探針法與多重PCR凝膠電泳法進(jìn)行檢測?！ 〗y(tǒng)計(jì)學(xué)方法 兩組檢測結(jié)果進(jìn)行配對(duì)卡方檢驗(yàn)及進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，分析兩種方法檢測結(jié)果的一致性。設(shè)定Kappa值若≥，一致性較好；若<，一致性不理想?！ ?結(jié)果 PCR
7、-熒光探針法與PCR凝膠電泳法檢測STS缺失一致性分析 使用多重PCR凝膠電泳法與PCR-熒光探針法分別檢測150例外周血標(biāo)本，二者在檢出率及檢出位點(diǎn)方面完全一致。配對(duì)卡方檢驗(yàn)顯示，與PCR-電泳法比較，PCR-熒光探針法的檢測結(jié)果二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，結(jié)果顯示Y染色體AZF區(qū)8個(gè)STS位點(diǎn)的P值及Kappa值均為1，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即PCR-熒光探針法與PCR-凝膠電泳法檢測AZF區(qū)微缺失位點(diǎn)無差異，二者一致性好。兩組方法檢測Y染色體AZF區(qū)微缺失符合情況見表1?！ 〔煌M別患者Y染色體微缺失情況分析 150例
8、受試者中，非梗阻性無精子癥54例，檢出Y染色體微缺失6例：嚴(yán)重少精子癥96例，檢出4例。其中，1例8位點(diǎn)及SRY全缺失者，之后測得其染色體核型為46，
