基于srap技術(shù)的甜橄欖種質(zhì)資源遺傳多樣性分析

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1、基于SRAP技術(shù)的甜橄欖種質(zhì)資源遺傳多樣性分析張小紅趙依杰林航福建省福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研宄所摘要：從100條SRAP引物屮篩選出12條具有多態(tài)性譜帶的引物，對福建省閩淸縣17份甜橄欖種質(zhì)資源進行SRAP分析。結(jié)果表明，12條引物共擴增得到72個位點，59個位點具有多態(tài)性，多態(tài)性比率為81.94%;17份甜橄欖種質(zhì)資源的相似系數(shù)0.796°.987;其中，羊尿與小個子種質(zhì)相似系數(shù)最高，為0.987。相似系數(shù)在0.846處，17份種質(zhì)資源可分為兩大類，勝利1號、羊屎、黃田、小箬、自來圓、山源1號和小個子為第一大類，其他為第二大類;進一步區(qū)分，在相似系數(shù)0.870處又可分為四類，第一類包括勝

2、利1號、羊屎、黃田、小箬、山源1號和小個子，第二類只有自來圓，第三類包括紅臉、竹岐1號、長營、徳士，其他為第四類。關(guān)鍵詞：橄欖;SRAP;親緣關(guān)系;聚類分析;作者簡介：張小紅(1979—)，碩士，副研宂員，研宂方向為果樹、瓜果品種選育與栽培生理。E-mail:ahjane@163.com作者簡介：趙依杰(1970—)，碩士，研究員，研究方向為果樹、瓜果品種選育與栽培。E-mail:zyjiel970@163.com收稿日期：2017-05-15基金：福州市科技攻關(guān)項目“優(yōu)質(zhì)鮮食甜橄欖山源1號的選育與推廣”(2013-N-48)資助Received：2017-05-15橄欖是Cana

3、riumalbum(Lour.)Raeusch.橄欖科橄欖屬喬木植物，為二倍體植物，染色體共46條。橄欖是福州特產(chǎn)，早在唐朝就被列為貢品。甜橄攬果實肉質(zhì)脆嫩、纖維極少、汁多味甜、細嚼后余味無窮，有獨特的藥用價值和保健功能。橄欖在我W種植歷史悠久，品種資源豐富，福州橄欖產(chǎn)地主要分布在閩江下游兩岸，以閩侯、閩清兩縣的產(chǎn)量最多。閩清是橄欖重要的種植基地，但地方橄欖種植年代久遠，技術(shù)落后，造成種性退化，分布零星，收集困難。因此利用分子標(biāo)記對橄欖種質(zhì)資源進行遺傳多樣性分析具有重要意義。對于橄欖種質(zhì)資源的分析，己有利用RAPD、TSSR、AFLP等技術(shù)進行了遺傳多樣性分析［1-9］。SRAP具

4、有較高位點和多態(tài)性檢測能力及操作簡便、費用低等優(yōu)勢，克服了RAPD穩(wěn)定性和重復(fù)性差的缺點，又克服了AFLP操作復(fù)雜、成本昂貴的缺點［10-11］。SRAP分子標(biāo)記自2001年確立以后，被廣泛應(yīng)用于各種植物的物種遺傳多樣性分析、遺傳圖譜構(gòu)建、重要性狀標(biāo)記及比較基因組學(xué)［12-14］。SRAP技術(shù)在橄欖上的應(yīng)用0前有張平湖等采用L16(45)正交試驗設(shè)計對橄欖品種SRAP擴培體系進行優(yōu)化［15］,但是并未深入利用SRAP技術(shù)進行種質(zhì)資源分類。閩清縣橄欖產(chǎn)業(yè)巨大，種質(zhì)資源背景不清，特別是甜橄欖資源的挖掘需要進一步深入。本研宄從閩清現(xiàn)有保存的鮮食橄欖種質(zhì)資源中選取具有代表性的17份種質(zhì)，釆

5、用SRAP技術(shù)進行遺傳多樣性分析，為甜橄欖品種分類鑒定、遺傳育種研究及種質(zhì)資源的有效保護和合理開發(fā)利用提供參考。1材料與方法1.1材料在福建省閩清縣建立了橄欖種質(zhì)資源圃，2014年10月9閂選取其中17份橄欖種質(zhì)資源，分別為檀香、勝利1號、林峰、惠圓(野生)、羊尿、徳士、大目程、黃田、長營、小箬、梅埔2號、竹岐1號、自來圓、山源1號、碼頭種、小個子和紅臉，依次編號為廣17,其屮除自來圓、惠圓為鮮食加工兩用橄攬品種外，其余品種為閩清現(xiàn)有保存的甜橄欖種質(zhì)資源。選用無病蟲害的嫩葉，洗浄并用液氮處理后，罝于-40°C冰箱保存?zhèn)溆谩?.2方法1.2.1橄攬總DNA提取與檢測采用改良的CTAB

6、法提取橄攬基因組DNA［16］,1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測其質(zhì)量,紫外分光光度計分析檢測其濃度，最后稀釋標(biāo)定到20ng/uL，放入-2(TC冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2引物篩選引物采用和QuirosUZl已發(fā)表的引物,選上下游引物各10個進行兩兩配對,共產(chǎn)生100對引物組合。選用3個外觀差笄較大的橄欖品種DNA進行引物篩選。1.2.3PCR反應(yīng)及電泳SRAP反應(yīng)體系參照柳李旺等的方法，反應(yīng)在PCR儀上進行。試驗采用20uL的SRAP擴增反應(yīng)體系，包括0.2mmol/L的dNTP,1.5U的Taq酶,1.5mmol/L的Mg,蒸餾水14.7uL，DNA50ng,0.16Pmol/L的單條

7、引物上下游。擴增程序:94°C5min預(yù)變性;接著進入5個循環(huán)，包括94°C5min，35°Clmin,72°C1min;隨之進入35個循環(huán)，包括94°Clmin,50°Clmin,72°Clmin;最后72°C延伸lOmin。擴增產(chǎn)物在1.8%瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測，電泳緩沖液為1XTBR,采用DL2000DNAMarker作為標(biāo)準(zhǔn)分子量對照，電泳時間45min。完成電泳之后，放入到凝膠成像分析系統(tǒng)中觀察拍照。1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計以上試驗獲得電泳圖，釆用軟件對其進行數(shù)據(jù)