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《g蛋白偶聯(lián)受體激酶5在胚胎造血過(guò)程中作用的分析及其相互作用蛋白的篩選》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文G蛋白偶聯(lián)受體激酶5在胚胎造血過(guò)程中作用的研究及其相互作用蛋白的篩選相互作用。在HEK293T細(xì)胞中通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GRKS與G戌L氣2存在相互作用。接下來(lái)通過(guò)體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)，我們將純化的GST或GST-GAI’A2蛋白與Flag一HA一GRKS和GsT偶聯(lián)的瓊脂糖樹(shù)脂一起孵育，得到的免疫復(fù)合物用SDS一隊(duì)GE進(jìn)行分離，再用W匕StemBlot方法進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)GRKS和GATAZ存在直接的相互作用。3、從野生型及GRKS基因敲除的成年小鼠眼眶靜脈叢采血后檢測(cè)外周血常規(guī)，發(fā)現(xiàn)與野生型小鼠相比，GRKS基因敲除的成年小鼠外周血中白細(xì)胞顯著減少且主要為粒
2、細(xì)胞的減少，紅細(xì)胞和血小板數(shù)目二者之間無(wú)差異。4、通過(guò)分別在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和人乳腺癌細(xì)胞(MDA一MB一231)中過(guò)表達(dá)GRKS，運(yùn)用免疫沉淀/質(zhì)譜的方法檢測(cè)了與GRKS有相互作用的蛋白，分析后結(jié)合免疫沉淀實(shí)驗(yàn)也對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證，我們發(fā)現(xiàn)，這些蛋白可大致分為三類:與RNA剪切相關(guān)的蛋白;與DNA損傷修復(fù)相關(guān)的蛋白;細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白。這些都提示GRKS可能通過(guò)這些與其相互作用的蛋白發(fā)揮多種多樣的目前還未知的功能。5、綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)了GRKS在小鼠胚胎造血中的調(diào)節(jié)作用及其對(duì)成年小鼠血液系統(tǒng)的影響，并新發(fā)現(xiàn)了一些與GRKS存在相互作用的蛋白。其中，GRKS基因
3、敲除后會(huì)導(dǎo)致小鼠胚胎血島發(fā)育受損，且成年小鼠外周血中白細(xì)胞的數(shù)目顯著減少，而外周血中白細(xì)胞的降低主要是粒細(xì)胞絕對(duì)數(shù)的減少。通過(guò)免疫沉淀/質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)與GRKS存在相互作用的蛋白中，一部分參與RNA的剪切;一部分與DNA損傷修復(fù)相關(guān);還有一部分屬于細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白，這些都提示GRKS可能通過(guò)這些與其相互作用的蛋白發(fā)揮多種多樣的目前還未知的功能，對(duì)于研究GRKS的新功能有一定的提示作用。關(guān)鍵詞:G蛋白偶聯(lián)受體激酶5;胚胎發(fā)育;胚胎造血復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文G蛋白偶聯(lián)受體激酶5在胚胎造血過(guò)程中作用的研究及其相互作用蛋白的篩選AbstractGProtein一eouPledre
4、eePtor(GPCR)15thegreatestfalllilyofmembranereeePtors.ItPlaysakeyroleintransdueingbroadextraeellularsignalsineludinghormones，ehemokines，neurotransmittersandotherenvironmentstimuliintotheintraeellular.GProtein一eouPledreeePtorkinases(GRKs)areknownasalargefamilyofserine/threoninekinasethatregu
5、lateGPCRsignaling.GRKsinteraetwiththeagonist一aetivatedGPCRstoeatalyzerecePtorPhosPhorylationandsubsequentlyleadstotheinternalizationanddesensitizationofGPCRs.Inmammalian，theGRKseonsistofsevenmembers(GRKI一7)，whieheanbedividedintothreesubfamiliesbasedonthesequeneeandfunetionalsilnilarities:(
6、1)therhodoPsinkinasesubfalnily(GRKIand7):(2)the日一adrenergiereeePtorkinasesubfamily(GRKZand3)and(3)theGRK4subfamily(GRK4，5and6).GRKS，oneofthernosteharaeterizedmembers，15widelydistributedinavarietyoforgans，esPeciallyhighexPressioninthehealtandlung，andPlaysimPortantroleinregulatingavarietyofP
7、hysiologiealandPathologiealProeesses.PreviousresearehesaboutGRKsmainlyfoeusedonthematurelydeveloPedorgans.Metayeetal.observedaninereaseinGRKZactivityandasignifieantdeereaseinGRKSeXPressionindifferentiatedthyroidearcinoma(DTC).知oekdownGRKSinosteosareomaeellsinL
