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《利用外顯子組測序技術(shù)篩選肝內(nèi)膽管癌突變基因及驗證usp17基因》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、解放軍醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明秉承我院“忠誠、敬業(yè)、和諧、創(chuàng)新”的學(xué)風(fēng)，本人聲明：所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位及證書而使用過的材料，對本文的研究作出貢獻(xiàn)的個人或集體，均已在文中做了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：日期：洲，【，，夕指導(dǎo)教師簽名：日期：州．g-．仔解放軍醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人保證畢業(yè)離院后，發(fā)表論文或
2、使用論文工作成果時署名單位為解放軍醫(yī)學(xué)院或解放軍總醫(yī)院。學(xué)院有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文原件、復(fù)印件和電子版本，可以采用影印、縮印、掃描或其它手段保存論文以供被查閱和借閱。學(xué)院可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)。論文作者簽名：李昊、日期：弘／‘萬方數(shù)據(jù)解放軍醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文目錄中文摘要．．1Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3前言5第一部分全外顯子深度測序及數(shù)據(jù)分析71．材料與方法一72．結(jié)果．．153．小結(jié)．20第二部分Sanger直接測序?qū)Y(jié)果驗證．211．材料與方法212．結(jié)果．．2s3．
3、硝、結(jié)．．．．．27第三部分免疫組化探究蛋白水平變化．291．材料與方法292．結(jié)果一312．／J、結(jié)．．32討論33參考文獻(xiàn)．35文獻(xiàn)綜述：肝內(nèi)膽管癌分子發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展39中英文對照縮略詞表54攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文．．54致謝55萬方數(shù)據(jù)解放軍醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文利用外顯子組測序技術(shù)篩選肝內(nèi)膽管癌突變基因及驗證USPl7基因中文摘要目的：利用深度測序技術(shù)探究腫瘤形成過程中相關(guān)的遺傳改變，希望找到與肝內(nèi)膽管癌形成和進(jìn)展相關(guān)的體細(xì)胞突變基因，為研究肝內(nèi)膽管癌病因，探尋合適的腫瘤診斷標(biāo)記物及治療靶點提供更多理論依據(jù)。方法：①收集中國人民解放軍總醫(yī)院肝膽外科201
4、4年5月至2014年12月經(jīng)手術(shù)治療的5例肝內(nèi)膽管癌患者癌組織及相應(yīng)癌旁組織，進(jìn)行外顯子組捕獲測序，經(jīng)生物信息學(xué)分析后挑選出候選基因。②收集來自中國人民解放軍總醫(yī)院肝膽外科2014年5月。2015年9月的肝內(nèi)膽管癌手術(shù)切除49例癌組織以及對應(yīng)癌旁肝組織(含以上高通量測序標(biāo)本)，其中肝外轉(zhuǎn)移組15例，非轉(zhuǎn)移組34例。設(shè)計引物，PCR擴(kuò)增目的片段后進(jìn)行Sanger測序，驗證深度測序結(jié)果，比較轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組中目的基因突變率差異。③采集中國人民解放軍總醫(yī)院病理科保存的2015年9月至2016年1月肝內(nèi)膽管癌術(shù)后標(biāo)本制成的蠟塊，癌組織及對應(yīng)癌旁組織各36例。采用免疫組化的方
5、法觀察USPl7蛋白表達(dá)水平在癌組織與癌旁組織，及癌組織轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組當(dāng)中的差異。結(jié)果：經(jīng)過對5對樣本的深度測序及生物信息學(xué)分析，篩選出USPl7LIO、SPDYEl、LRRC37A3、SIMCl、TPSDI、PRAMEFl8、TBCID3G、OBSCN等在肝內(nèi)膽管癌中新發(fā)現(xiàn)的8個基因的12個SNV位點作為候選突變基因位點。擴(kuò)大樣苯量行Sanger測序發(fā)現(xiàn)在49例肝內(nèi)膽管癌組織DNA中發(fā)現(xiàn)7例發(fā)生了與深度測序突變位點相同的USPl7LIO點突變，突變頻率為14．3％，即在4號染色體基因組9213473位置(該基因序列1091位置，NM001256852．1)發(fā)生G
6、>C點突變，為錯義突變，AGT-◆ACT，絲氨酸變?yōu)樘K氨酸，雜合子突變型。癌旁組織未見該突變。7例突變標(biāo)本中5例發(fā)生在15例轉(zhuǎn)移組中(33．3％)，2例發(fā)生在34非轉(zhuǎn)移組中(5．9％)，轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組的突變率有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P<0．05)。免疫組化顯示36例肝內(nèi)膽管癌組織中存在16側(cè)USPl7陽性(44．4％)，36例癌旁組織中5例陽性(13．9％)，萬方數(shù)據(jù)解放軍醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文且兩者陽性率有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P<0．05)。16例陽性癌組織中，6例屬轉(zhuǎn)移組，10例為非轉(zhuǎn)移組，兩者陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(胗0．05)。結(jié)論：USPl7基因突變可能與肝內(nèi)膽管
7、癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)，并與腫瘤的肝外轉(zhuǎn)移關(guān)聯(lián)。USPl7蛋白在癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁組織。嬲PJ7基因突變在肝內(nèi)膽管癌中的作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步深入研究?！娟P(guān)鍵詞】肝內(nèi)膽管癌：深度測序；全外顯子組：基因突變：Sanger測序：USPl72萬方數(shù)據(jù)解放軍醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文DeepSequencingIdentifiesMutationGenesRelatedtoIntrahepaticCholangiocarcinomaandVaHdationoftheUSPl7MutationAbstractObjective：Toinvestigatecandidategenes
