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《抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體的研制及效果的分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體的研制及效果的研究摘要本研究制備了抗豬圓環(huán)病毒2型特異性卵黃抗體，研究了抗體體外和小鼠體內(nèi)抑制病毒增殖的能力。主要研究?jī)?nèi)容如下：1．抗豬圓環(huán)病毒2型特異性卵黃抗體的制備選取32只22周齡健康產(chǎn)蛋雞，隨機(jī)分為4組，每組8只，每只為一個(gè)重復(fù)。對(duì)照組注射生理鹽水，試驗(yàn)組1：用滅活的PCV2與弗氏佐劑乳化后逐次增加劑量免疫蛋雞；試驗(yàn)組2：用滅活的PCV2與弗氏佐劑乳化后保持相同劑量免疫蛋雞；試驗(yàn)組3：用PCV2免疫蛋雞；共免疫五次。用ELISA和膠體金兩種方法檢測(cè)蛋雞血清抗體和卵黃抗體水平，水稀釋．硫酸銨一次鹽析．二次
2、鹽析．透析．濃縮提取IgY，BCA法檢測(cè)每一次提取后所獲得的蛋白濃度，SDS．PAGE檢測(cè)各步驟提取后IgY純度。結(jié)果表明：各試驗(yàn)組蛋雞的血清抗體水平始終高于卵黃抗體水平，試驗(yàn)組l所獲得的抗體效價(jià)最高，最高效價(jià)可達(dá)到1：640，并且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，持續(xù)時(shí)間可達(dá)8周以上；通過水稀釋．硫酸銨一次鹽析．二次鹽析．透析．濃縮各步驟提取，每10nll卵黃液最終可獲得卵黃抗體51．67mg；經(jīng)SDS—PAGE檢測(cè)，雜帶較少，抗體純度較．__；-局o2．抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體的體內(nèi)外中和試驗(yàn)IgY的最大無毒作用濃度的研究：在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，將卵黃抗
3、體倍比稀釋成不同濃度，加入長(zhǎng)成良好的細(xì)胞，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞病變情況；IgY體外中和試驗(yàn)：將卵黃抗體倍比稀釋成不同濃度，與200TCID50的PCV2體外中和1h后加入長(zhǎng)成良好的細(xì)胞，培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞，提取病毒DNA，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定病毒的拷貝數(shù)；IgY體內(nèi)中和試驗(yàn)：選取30只8周齡SPF級(jí)BALB／c小鼠，分為3組，陰性對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水，0．5ml／只；試驗(yàn)組：IgY與PCV2(107TCID5dml)中和一個(gè)小時(shí)后腹腔注射，O．5ml／只；陽性對(duì)照組：腹腔注射PCV2(107TCID5dml)，0．5ml／
4、只，于7d、14d采集血液和組織，檢測(cè)小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制情況和血清抗體水平。IgY細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果表明：IgY不引起細(xì)胞產(chǎn)生CPE，但會(huì)促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，產(chǎn)生細(xì)胞堆積，并且隨著IgY濃度的降低，堆積現(xiàn)象逐漸減少，當(dāng)IgY濃度為0．9mg／ml時(shí)，堆積現(xiàn)象消失；IgY體外中和試驗(yàn)表明：當(dāng)IgY的濃度為225肛g／ml時(shí)，陽性對(duì)照組和試驗(yàn)組細(xì)胞中PCV2的拷貝數(shù)存在顯著差異，處華中農(nóng)業(yè)人學(xué)201l屆碩上研究生學(xué)位論文理組IgY抑制了病毒的復(fù)制，并且隨著IgY濃度的增加，病毒的拷貝數(shù)逐漸降低；IgY體內(nèi)中和試驗(yàn)結(jié)果表明：當(dāng)IgV濃度為100mg
5、／ml時(shí)，IgY能夠明顯抑制小鼠組織中PCV2的增殖。關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒；卵黃抗體；BALB／e小鼠；體外中和試驗(yàn)；體內(nèi)中和試驗(yàn)Ⅱ抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體的研制及效果的研究Abs仃actInthisstudy，specificIgYagainstporcinecircovirustype2wasprepared，andtheeffectsofantibodieswhichinhibitsvirusweredinvestigatedinvitroandinmiceconditions．，nlemaincontentsareasfollo
6、ws：1．PreparationofspecificeggyolkantibodyagainstPCV232healthylayinghensof22weeksoldweredividedinto4groups，wiⅡl8replicationspergroup．Controlgroupinjected、7l，itllsaline；Testgroup1：inactivatedPCV2emulsifiedwithFreund’Sadjuvantwithincreasingdose；Testgroup2：inactivatedPCV2em
7、ulsified謝mFreund'sadjuvantwithmaintainthesamedose；Testgroup3：inactivatedPCV2，atotalimmunizationforfivetimes．TheantibodylevelinserumandeggyolkWasdetectedbybothELISAandimmunitycolloidgold；IgYWasisolatedfromeggyolkbywaterdilution,salting—out，thesecondsalting—out,dialysisan
8、dconcentration；BCAmethodassaytheproteinconcentrationofeachextraction；ThepurityofeachextractionstepWasdetectedb
