殼寡糖的酶法制備研究及其初步分離

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1、殼寡糖的酶法制備分析及其初步分離．摘要．殼聚糖有豐富的資源，在食品、醫(yī)藥、環(huán)保領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，但殼聚糖的分子量大、水溶性差，限制了它的應(yīng)用。殼寡糖是其降解產(chǎn)物，它不但保留了殼聚糖的某些功能特性，還有良好的水溶性等特點(diǎn)，更具有應(yīng)用價(jià)值。酶法降解是廣泛使用的降解方法，可選擇特異性的切斷p一1，4糖苷鍵，反應(yīng)條件溫和、過程易控制，可通過條件的控制得到不同分子量范圍的殼寡糖。本課題以實(shí)驗(yàn)室保藏的一株產(chǎn)殼聚糖酶菌株朋弧螂婦sp．14l一2為研究對(duì)象，主要圍繞酶法降解殼聚糖的方向展開工作，首先對(duì)菌株產(chǎn)酶的發(fā)酵階段進(jìn)行優(yōu)化來(lái)提高酶活，繼而對(duì)該酶降解殼聚糖底物的條件進(jìn)行優(yōu)化，然后對(duì)酶解產(chǎn)物

2、進(jìn)行了分析檢測(cè)，最后對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行初步的分離純化。具體研究結(jié)果如下：1、采用菌體富集和誘導(dǎo)產(chǎn)酶兩步法對(duì)菌株發(fā)酵階段進(jìn)行優(yōu)化，菌體富集階段優(yōu)化后的培養(yǎng)條件為：2．5％葡萄糖，O．9％蛋白胨，0．14％K2HP04，0．06％KH2P04，O．1％MgS04，180nlL／1000mL，30℃，180叩m；優(yōu)化后的誘導(dǎo)條件為：1．5％的殼聚糖底物誘導(dǎo)3d。最終，菌濃度是起始條件的3倍，酶活由最初的3．5I，／mI．提高到了6．1U／n[1L。2、采用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)酶解條件進(jìn)行了優(yōu)化。最適條件為：底物濃度3％，pH5．2～5．6，溫度65℃，加酶量7U／g殼聚糖。該酶適合降解脫乙酰度

3、居中(85％左右)的殼聚糖。3、對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行了分析檢測(cè)。通過水解產(chǎn)物的TLC圖和平均聚合度聯(lián)系可得，該酶主要以內(nèi)切方式隨機(jī)水解殼聚糖，酶解產(chǎn)物為不同聚合度殼寡糖的混合物。本研究還摸索出了通過選擇不同的加酶量和酶解時(shí)間得到所需分子量的殼寡糖的方法。4、對(duì)低聚殼聚糖進(jìn)行了初步分離。采用乙醇分布沉淀法對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行初步分離，75％乙醇沉淀即可除去聚合度約為9以上的殼聚糖，87．5％乙醇沉淀則可除去聚合度約為7以上的殼聚糖。關(guān)鍵詞：殼聚糖；酶解；殼寡糖；殼聚糖酶華中農(nóng)業(yè)大學(xué)20ll屆碩士研究生學(xué)位論文AbstractChitosaIlisrichiIlnatIlrea11d“haS

4、beenwidely叩pliedinfood，medicine，enVhmentalprotectionindus缸y．ButitSapplicatiollSbecoⅡleliIIlitedbecauSeofitsllighmolecul甜wei曲ts鋤dpoors01ubjlj吼Chitooligosacch撕desarctlleproductsbymcdegradationofchitosan．C11itooligosaccharidesnotoIllyretainsome缸nctionalpmpeniesofchitosan，butalsoh嬲water-soluble

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