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《褐藻膠酶解寡糖的制備、分離和結(jié)構(gòu)鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文褐藻膠酶解寡糖的制備、分離和結(jié)構(gòu)鑒定姓名：張真慶申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生藥學(xué)指導(dǎo)教師：管華詩2003.6.1酶解褐藻膠寡糖的制備、分離和結(jié)構(gòu)鑒定摘要目的：本論文利用菌株Vibrio510產(chǎn)生的褐藻膠裂解酶降解褐藻膠，探討酶解得到褐藻膠寡糖的生產(chǎn)工藝，及分離純化褐藻膠寡糖以得到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品從而豐富海洋寡糖庫，以此為基本目的和出發(fā)點，并且為探討該褐藻膠裂解酶酶解行為、酶解位點，做先期的工作。方法：應(yīng)用紫外法與DNS法對該褐藻膠裂合酶的酶活進(jìn)行測定。應(yīng)用紫外掃描法、凝膠滲透色譜技術(shù)(HPGPc——TSKG2500PWxL)和聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PA
2、GE)對不同時間酶解產(chǎn)物組分的分子量及相對含量加以分析。對酶解寡糖進(jìn)行分離純化：應(yīng)用凝膠過濾色譜法(Bio．GelP一4；P．6)、陰離子交換色譜法(Q。Sepharose．FastFlow)，其問應(yīng)用新技術(shù)——快速液相色譜儀(FPLC)對分離條件進(jìn)行優(yōu)化和確定。對所得寡糖應(yīng)用灌注色譜技術(shù)(HQ．20)檢測其純度。并應(yīng)用此方法進(jìn)一步純化；同時運用熒光輔助糖電泳(FACE)和高效毛細(xì)管電泳(HPCE)技術(shù)作為進(jìn)一步檢測純度的方法。應(yīng)用ESI—MS、NMR等對得到的寡糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：本文應(yīng)用紫外法和DNS法對該酶的酶活進(jìn)行檢測，從海藻中篩選出的菌株Vibrio510
3、所產(chǎn)褐藻膠裂解酶有較高的比活力：22，5unit／mL。HPGPC和PAGE方法對褐藻膠的降解程度有良好的檢測效果，快捷、高分辨率和直觀是這兩種方法的共同點。凝膠滲透色譜與陰離子交換色譜均對褐藻膠寡糖有良好的分離效果，得到四個組分。經(jīng)灌注層析進(jìn)一步純化，應(yīng)用FACE和HPCE檢N-糖為一結(jié)構(gòu)單一的化合物，三糖到五糖＼，、-———一～‘～——，“’—一均有異構(gòu)體的存在。應(yīng)用ESI．MS確證四個組分分別為二糖到五糖，且聚合度單、、_，‘、—··-——’，一一。同時對結(jié)構(gòu)單一的二糖利用1H．NMR，”C—NMR，1H13CHMQC和1H-1HCOSY進(jìn)行了結(jié)構(gòu)的確定——非還
4、原端存在雙鍵的古羅糖醛酸二糖。討論：一方、、，～、—，—、—／，—'————一、、一．—／一面，通過進(jìn)一步的分離純化得到單一結(jié)構(gòu)的化合物，在對單體結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析確定的同時，所得結(jié)果將會為酶解行為特點的確定提供必要的信息，以便于對酶解工藝作進(jìn)一步的指導(dǎo)：另一方面得到較高聚合度的寡糖，并進(jìn)行活性的篩選。關(guān)鍵詞：褐藻膠裂解酶寡糖分離純化結(jié)構(gòu)分析Preparation，IsolationandStructureelucidationofalginateoligomersdegradedbythealginateiyaseAbstractTlliSthesismainlyinvo
5、lvedtheproducingtechnicsandpreparationofalginateoligomersdegradedbyanalginatelyase．whichwasproducedbyastainV／brio510selectedfromalgae．a(chǎn)smarkers．Anotheraimofpreparationisenrichmentoflibraryofmarineoligosaccharides．Atthesametimeisolationpurificationandstructureconfirmingoftheseblocksisthe
6、firststageofdeterminationofactionpatternofthelyase．Thealginatelyasehashigherspecificactivityof22．5unit／mL．AnalysisofthedegreeofdegradationbyUVscan，HPGPCandPAGE，analysisofsamples’molecularandpercentofeveryfractionbyHPGPC，inwhichseriesTSKG3000PWxlandTSKG2500PWxI．wasapplied，arethefoundatio
7、nofproducingtechnicsofalginateoligomers．Isolationandpurificationofalgmmeoligomers：Gelfilterchromato腳hy(Bio—GelP-4，P-6)andanionexchangechromatography(Q—sepharoseFast．Flow)wereapplied，inwhichfastperformanceliquidcllromato鱸印hy(FPLC)wasappliedandtherearegoodresults．Fourblocks(dp：2-
