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1、豆豉中黃曲霉毒素B1測(cè)定方法研究劉宏程1*作者簡介：劉宏程（1975~），男，碩士，主要從事食品安全研究。通信地址：昆明學(xué)府路農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢中心，云南省農(nóng)科院。Email:liuorg@163.com.云南省農(nóng)科院院立課題資助,鄒艷紅1,張玉榮2，黎其萬1,黃思司1，楊東順1（1農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（昆明），云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，昆明,650223;2玉溪市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，玉溪，653100）摘要用間接競爭性ELISA法測(cè)定豆豉中黃曲霉毒素B1(AFB1)，結(jié)果為陽性，用熒光檢測(cè)器測(cè)定的HPLC方法驗(yàn)證，結(jié)果為假陽性。ELISA法測(cè)定AFB1步驟簡便、快速、操作安全，但對(duì)豆
2、豉樣品容易產(chǎn)生假陽性，需要通過HPLC方法確認(rèn)。建議豆豉樣品不宜采用ELISA測(cè)定黃曲霉毒素B1。關(guān)鍵詞黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫吸附法高效液相色譜豆豉DeterminationOfAflatoxinB1InLobsterSauceWasResearchedLiuHongcheng1*,ZhouYanhong1,ZhangYurong2,LiQiwan1,HuangSisi1,YangDongshun1(1Supervision&TestingCenterforFarmProductQuality,ministryofagriculture,(Kunming),Yunnanacade
3、myofagriculturescience,Kunming650223;2Yuxiacademyofagriculturescience,Yuxi,653100,China)Abstract:AflatoxinB1inLobsterSauceisdeterminedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA),theresultistrue;ItthatisvalidatedbyHPLCwithFluorescentisfalse.DeterminationofAFB1issimple,rapid,safebyELISA,butitsresu
4、ltisfalseinlobstersauce,whichisvalidatedbyHPLC.ItisnotrecommendedthatthemethodofdeterminationAFB1inlobstersaucebyELISA.Keyword:AFB1,ELISA,HPLC,LobsterSauce黃曲霉毒素(Aflatoxin，AF)是真菌毒素中毒性最大的一種，是世界上公認(rèn)的最強(qiáng)化學(xué)致癌物質(zhì)，危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用,嚴(yán)重時(shí),可導(dǎo)致肝癌甚至死亡.，1993年被WHO癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為Ⅰ類致癌物。在天然污染的食品中存在的黃曲霉毒素以B1(AFB1，結(jié)構(gòu)如圖
5、1)污染最多見，其毒性和致癌性也最強(qiáng)。要嚴(yán)格控制食品中黃曲霉毒素的含量，必須要有快速、靈敏、準(zhǔn)確、有效的分析測(cè)定方法作保證。圖1黃曲霉毒素B1分子結(jié)構(gòu)式（Fig1.structureofaflatoxinB1AFB1）目前檢測(cè)AFB1的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法,薄層色譜和高效液相色譜法。酶聯(lián)免疫吸附法[1-3]是目前測(cè)定黃曲霉毒素B1的快速方法，靈敏度高、檢驗(yàn)速度快、操作安全，成本低，由于該方法是生物化學(xué)法，具有對(duì)酸對(duì)鹽敏感的特點(diǎn)，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果,需要結(jié)合其他分析方法進(jìn)行確認(rèn)如同位素稀釋質(zhì)譜[4]、薄層色譜[5]、HPLC/MS[6]和免疫親和凈化法[7]等。高效液相色譜法[8
6、，9]測(cè)定黃曲霉毒素具有準(zhǔn)確度高、精密度好的特點(diǎn)，主要用于測(cè)定糧谷[10-12]，玉米[13]、花生[14]、中藥[15]中黃曲霉毒素B1。在進(jìn)行無公害食品-豆豉的認(rèn)證過程中，按國家標(biāo)準(zhǔn)[16]利用酶聯(lián)免疫方法對(duì)豆豉樣品中AFB1殘留的測(cè)定，結(jié)果為陽性，通過選擇最佳色譜條件，在HPLC上把干擾物質(zhì)和AFB1完全分離，可以確認(rèn)豆豉中AFB1為假陽性，對(duì)于其他豆豉樣品也有類似情況存在，建議豆制品不宜采用ELISA方法進(jìn)行測(cè)定，有條件實(shí)驗(yàn)室宜采用HPLC方法直接進(jìn)行測(cè)定。1.實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器及試劑Model680酶標(biāo)儀（Bio-Rad公司），酶標(biāo)微孔板（96孔），恒溫水浴鍋，恒溫培養(yǎng)
7、箱，微量加樣器及配套吸頭，Alliance2695高效液相色譜儀(Waters公司)，配置四元泵溶劑淋洗系統(tǒng)，自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，2475熒光檢測(cè)器，Sartorius純水器(Germany公司)。試劑：三氯甲烷（分析純），甲醇（分析純），乙酸（優(yōu)級(jí)純），甲醇和乙腈（Fisher,HPLC級(jí)）。黃曲霉毒素B1試劑盒（北京百林康源生物有限公司）包含：PBS-T洗液，抗體，酶標(biāo)二抗，陰性對(duì)照液，底物，底物液A，底物液B，終止液。1.2樣品溶液制備及測(cè)定準(zhǔn)確稱取20g粉碎樣品于250mL具塞
