雙熒光素酶報(bào)告基因

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1、為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車場安保新項(xiàng)目的正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃雙熒光素酶報(bào)告基因　　雙熒光素酶報(bào)告基因分析　　1.介紹熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控常被用來研究培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特性。熒光素酶是理想的報(bào)告基因，因?yàn)椴溉閯?dòng)物細(xì)胞中不含內(nèi)源性熒光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的熒光素酶?！　ual-Luciferase?雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)中含有在同一細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)的兩種熒光素酶。通常，報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)中往往會受到各種實(shí)驗(yàn)條件的影響，共轉(zhuǎn)染的“

2、對照”報(bào)告基因會作為內(nèi)對照，為試驗(yàn)提供一基準(zhǔn)線。實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因經(jīng)過內(nèi)參照的處理可以減小細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率對實(shí)驗(yàn)的影響，因此雙報(bào)告系統(tǒng)減少了外部干擾，使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更可信。實(shí)驗(yàn)中報(bào)告基因和對照基因的酶沒有種源同源性，螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對應(yīng)不同的反應(yīng)底物，反應(yīng)中沒有任何的交叉干擾?！　∥灮鹣x熒光素酶底物和海腎熒光素酶底物分別與檢測試劑反應(yīng)可以使靈敏度最大化。由于超強(qiáng)的光信號和超高的信噪比，本系統(tǒng)被廣泛用于制藥和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)中。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)適配于各種培養(yǎng)哺乳細(xì)胞的培養(yǎng)基，如1640

3、，MEM，DMEM，F(xiàn)12等。這些試劑與被動(dòng)裂解液所附帶的試劑盒，可以從Promega試劑盒中分開，單獨(dú)使用。目的-通過該培訓(xùn)員工可對保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車場安保新項(xiàng)目的正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　具有超高靈敏度和超寬線性范圍的Veritas?微孔板發(fā)光檢測儀特別適合DLR報(bào)告基因檢測系統(tǒng)，Veritas?軟件中預(yù)裝了DLR的檢測程序使得安裝更

4、為方便，內(nèi)置自動(dòng)加樣器使得應(yīng)用更為簡單。　　Veritas?微孔板發(fā)光檢測儀使用熒光素酶檢測試劑II(LARII)最低可以檢測到1X10-19mol熒光素酶分子，使用Stop&Glo?試劑可以檢測到1X10-18mol海腎熒光素酶分子，檢測線性范圍分別為8和6個(gè)數(shù)量級。所有的檢測均采用純化的重組螢火蟲熒光素酶(E1701)和純化的重組海腎熒光素酶?！　D1－3使用Promega公司Dual-Luciferase?雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)，螢火蟲熒光素酶(1x10-19到1x10-11mol)和

5、海腎熒光素酶(1x10-14mol)在Modulus?儀上測量結(jié)果。　　2.所需器材　　?Veritas?微孔板發(fā)光檢測儀　　(P/N9100-002)　　?96孔白板(E&KScientificEK-25075)　　?Dual-LuciferaseReporter?熒光素酶檢測系統(tǒng)(E1980)　　?P200移液器和槍頭　　3.實(shí)驗(yàn)方案　　試劑制備目的-通過該培訓(xùn)員工可對保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)

6、展，保障停車場安保新項(xiàng)目的正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　熒光素酶檢測緩沖液II和熒光素酶檢測底物：使用所提供產(chǎn)品，－20℃儲存，可以穩(wěn)定保存6個(gè)月，熒光素酶檢測底物可以4℃保存1個(gè)月。將熒光素酶檢測緩沖液II加入熒光素酶檢測底物中，配制DLR工作液，顛倒混合，直到底物徹底溶解。配好試劑最好當(dāng)天使用，也可以將配好試劑分裝，-20°C儲存1月，-70℃儲存1年。Stop&Glo?底物和Stop&Glo?底物緩沖液：使用所提供產(chǎn)品，－20℃儲存。　　Stop&Gl

7、o?底物溶解緩沖液：使用所提供產(chǎn)品，低于25℃儲存。在玻璃管或者硅化聚丙烯酸樹脂管中將　　50×Stop&Glo?底物稀釋成1×Stop&Glo?工作液。顛倒混合，工作液最好當(dāng)天使用，也可以將工作液分裝，-20°C儲存2周?！　”粍?dòng)裂解緩沖液：用去離子水將5x被動(dòng)裂解緩沖液稀釋成1x的，低于25°C保存?！　∽ⅲ阂?yàn)闊晒馑孛富钚允軠囟扔绊?，在定量發(fā)光檢測過程中Dual-Luciferase?熒光素酶緩沖液II和Stop&Glo?緩沖液應(yīng)始終保持室溫?；旌显噭﹥龃婧笤俅问褂茫瑸榇_保試劑性能，應(yīng)在低

8、于25℃條件下溶解。溶解后充分混勻，最簡單的方法是室溫水浴溶解?！　x器安裝　　雙擊Veritas圖標(biāo)運(yùn)行軟件；目的-通過該培訓(xùn)員工可對保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車場安保新項(xiàng)目的正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　從"WelcometoVeritas"對話框中點(diǎn)擊"RunPromegaProtocol"；　　瀏覽"DLR"文件夾，選擇合適的檢測程序，例如DL