銀杏葉黃酮提取及含量測定

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1、銀杏葉黃酮提取及含量測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握銀杏葉中黃酮的提取方法2、了解銀杏葉中黃酮的含量測定二、實(shí)驗(yàn)原理近幾年來，隨著對黃酮類化合物研究的日益深入與重視，黃酮類化合物提取技術(shù)的發(fā)展也得到了促進(jìn)。目前提取黃酮類化合物的方法主要包括有機(jī)溶劑浸提法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法、微波提取法和酶提取法等。１．１　有機(jī)溶劑浸提法目前國內(nèi)外使用最廣泛的銀杏葉中黃酮的提取方法就是有機(jī)溶劑提取法，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇或某些極性較大的混合溶劑，如甲醇－水（１＋１）溶液。由于甲醇的毒性、揮發(fā)性較大，因此一般采

2、用乙醇作為提取劑。銀杏葉干燥粉碎后用有機(jī)溶劑浸泡、提取、過濾，濾液中的溶劑經(jīng)減壓蒸餾除去后得銀杏葉浸膏粗提物。徐桂花等［１］提取銀杏葉中黃酮類化合物時(shí)，采用乙醇（７０＋３０）溶液為提取劑，提取溫度為７０℃，料液質(zhì)量濃度比為１ｇ比４０ｍＬ，提取時(shí)間為４ｈ。由于乙醇提取工藝在安全性、溶劑成本、效率及雜質(zhì)酚酸去除等方面都不能應(yīng)對日益嚴(yán)酷的市場競爭，張林濤等［1］提出了以硼砂－氫氧化鈣堿水為溶劑提取銀杏葉黃酮，其黃酮提取率與文獻(xiàn)值相近，但提取工藝時(shí)間縮短為１ｈ。１．２　超聲波提取法超聲波提取法是利用攪拌作用、強(qiáng)烈的振

3、動和空間效應(yīng)、高的加速度等使藥物有效成分進(jìn)入溶劑，從而提高提取率，縮短提取時(shí)間，并能消除高溫對提取成分影響的一種提取法。劉晶芝等［2］運(yùn)用了超聲波技術(shù)與水浸提取相結(jié)合的方法得出超聲波提取的最佳工藝條件為：超聲頻率４０ｋＨｚ，超聲處理時(shí)間５５ｍｉｎ，料液質(zhì)量比１比１００，提取溫度３５℃，靜置３ｈ，提取率為８１．９％。郭國瑞等［3］以水為介質(zhì)，超聲波提取銀杏葉中黃酮苷，與常規(guī)水浸提法比較，超聲波提取效率大大提高，確定超聲波提取的最佳工藝為：超聲處理時(shí)間５５ｍｉｎ，料液質(zhì)量比１比３０，提取溫度５０℃，提取率為８２．

4、３％。１．３　超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法是一種以超臨界流體代替常規(guī)有機(jī)溶劑對有效成分進(jìn)行萃取和分離的新技術(shù)。可作為超臨界流體的物質(zhì)很多，其中二氧化碳臨界溫度（ＴＣ＝３１．３℃）接近室溫，且具有無色、無毒、無味、不易燃、化學(xué)惰性、價(jià)廉、易制成高純氣體等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用，特別在中藥材及其制劑中更顯示出其獨(dú)特、簡便、快速、具有較高的選擇性、提取雜質(zhì)少、可直接進(jìn)樣分析的優(yōu)點(diǎn)。鄧啟煥等［4］探討了超臨界萃取銀杏葉有效成分的影響因素，最佳條件為萃取壓力２０ＭＰａ、時(shí)間９０ｍｉｎ、粒度３．９ｍｍ、溫度４０℃，經(jīng)測定銀

5、杏葉黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為２８％，高于國際公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)。１．４　微波提取法微波提取法是利用分子或離子在微波場中的導(dǎo)電效應(yīng)直接對物質(zhì)進(jìn)行加熱從而提取植物細(xì)胞內(nèi)耐熱物質(zhì)的新工藝。曾里等［5］的研究表明以乙醇溶液作溶劑比以水作溶劑的效果好，最佳條件為以乙醇（６０＋４０）溶液為提取劑，解凍處理２０ｍｉｎ。張鵬等［6］對微波法提取銀杏葉中黃酮類物質(zhì)進(jìn)行了研究，最佳提取條件為以乙醇（５０＋５０）溶液為提取劑，料液比為１ｇ比２５ｍＬ，回流溫度７０℃，微波時(shí)間１２０ｓ，該條件下總黃酮提取率為１１．０２％。但微波提取存在局限性，它要求被

6、處理的物料具有良好的吸水性而且只適用于生物細(xì)胞內(nèi)耐熱物質(zhì)的分離提取，否則細(xì)胞難以吸收足夠的微波將自身擊破，產(chǎn)物也難以迅速釋放出來。１．５　酶提取法酶提取法是利用酶反應(yīng)的高度專一性，將細(xì)胞壁的組成成分水解或降解，破壞細(xì)胞壁，從而提高有效成分的提取率。在銀杏葉總黃酮提取過程中，由于細(xì)胞壁的束縛作用，總黃酮不易溶出。酶提取法能將組成細(xì)胞壁的纖維素骨架逐級降解成葡萄糖，進(jìn)而破壞細(xì)胞壁骨架結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞內(nèi)有效成分的溶出。吳梅林等［7－１０］采用纖維素酶對銀杏中黃酮類化合物進(jìn)行了提取，三者的酶解條件分別為酶質(zhì)量濃度０．４

7、０ｇ·Ｌ－１，酶作用時(shí)間１２０ｍｉｎ，酶解溫度５０℃，酶解介質(zhì)ｐＨ?。矗担掖迹ǎ罚常┤芤?，提取溫度７０℃；纖維素酶濃度４０Ｕ／ｍＬ，酶解ｐＨ?。矗福附鉁囟龋担怠?，酶解時(shí)間９０ｍｉｎ；維素酶用量３０ＦＰＩＵ／ｇ銀杏葉、酶解時(shí)間５０ｍｉｎ。此外，許明淑等［１１］利用Ｓｕｈｏｎｇ?。牵痢。矗罚缔D(zhuǎn)苷酶和麥芽糖基供體將極性低的黃酮苷元轉(zhuǎn)為黃酮苷，提高了總黃酮在醇水中的溶解率。結(jié)果表明：溫度為５５℃～６０℃，ｐＨ為６．０～６．５，反應(yīng)時(shí)間為１０ｈ時(shí)，總黃酮的提取率比未加酶對照組增加了４４％。王建偉等［１２］采用

8、復(fù)合酶對銀杏葉進(jìn)行初步的預(yù)處理，然后用轉(zhuǎn)化酶將黃酮苷轉(zhuǎn)化為生物活性較強(qiáng)的苷元類物質(zhì)，銀杏提取物（含銀杏黃酮醇苷不小于２４％）經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化后各苷元的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為：槲皮素占２４．８７％，山奈酚占３０．１８％，異鼠李素占４．６０％，總苷元質(zhì)量分?jǐn)?shù)為５９．６５％，顯著提高了銀杏葉提取物（ＧＢＥ）的生理活性和苷元黃酮的含量，從而大大提高了銀杏黃酮的生物學(xué)效價(jià)。本實(shí)驗(yàn)中提取采用第一種方法——溶劑提取法。對銀杏中黃