豬精液常溫保存效果的研究于夢然

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1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)課程論文學(xué)院：動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院班級：2008級畜牧班姓名：于夢然學(xué)號：200840511103課程論文題目：豬精液常溫保存效果的研究課程名稱：家畜繁殖學(xué)評閱成績：評閱意見：成績評定教師簽名：日期：年月日豬精液常溫保存效果的研究學(xué)生：于夢然（動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院2008級畜牧班，學(xué)號：200840511103）摘要：主要從稀釋液配方、稀釋比例等方面研究了豬精液常溫保存的效果。稀釋液中影響精子活率的因素很多，主要有溫度、稀釋液的緩沖能力、組分、滲透壓等。稀釋比例也是影響精液保存效果的主要因素之一。關(guān)鍵詞：精液；稀釋；常溫保存；精子活率為了有效地開展豬的人工授精，精液的稀釋保存

2、是關(guān)鍵技術(shù)。精液冷凍技術(shù)的成功，使精液得以長期保存，但對豬而言由于技術(shù)難度大，也受成本高、受胎率較低的限制，豬的精液冷凍保存技術(shù)仍處于試驗階段。國際上，對豬精液常溫保存十分重視。多年來國外研究者做了大量工作。取得了較好的效果。我國的許多科研工作者也進行了豬精液常溫保存、授精效果和稀釋液配方研制等方面的研究，且取得了一定的進展。但是，目前由于國產(chǎn)稀釋液的保存效果不如進口稀釋液，我國很多大型豬場依然采用進口的稀釋液進行人工授精，昂貴的費用限制了該項技術(shù)的推廣。因此，為了在基層、大型豬場普及和推廣豬人工授精技術(shù)我們進行了本研究。1材料與方法1．1稀釋液配制配方：葡萄糖(右旋糖)2.75

3、克，檸檬酸鈉0.69克，碳酸氫鈉0.1克，乙二胺四乙酸二鈉0.235克，檸檬酸0.29克，氯化鉀0.88克，青霉素1000IU/ml，雙氫鏈霉素1000IU/ml，卵黃3ml。1．2采精時間：2011年04月20日。1．3精液處理與保存精子活率的染色采用伊紅染色，在顯微鏡下觀察。視野中被染成紅色的精子為死精子。原精液活率在0.9以上。密度約為3×107～4×107。根據(jù)實驗設(shè)計要求按比例等溫稀釋后裝入青霉素小瓶中，緩慢降溫至（17±0.5）℃，置于恒溫箱中低溫（17±0.5）℃保存。1．4精液品質(zhì)檢查方法1．4．1精子活率：直線運動的精子占視野中精子的百分率。1．4．2精子生存指

4、數(shù)：*時間間隔+xn-1tn-1/21．5試驗設(shè)計1．5．1不同稀釋比例的稀釋液對豬精液的保存效果：稀釋比例分別為1：1，1:3，每種稀釋比例配制10個，間隔5小時測定一次精子活率。1.6精子活率檢查取1～2滴精液滴于37℃恒溫臺上的潔凈的載玻片上，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察，計算視野中直線運動的精子。1．7數(shù)據(jù)處理計劃采用t檢驗及方差分析進行數(shù)據(jù)處理。2結(jié)果2．1不同稀釋液對豬精液的保存效果表1不同稀釋液對豬精液的保存效果配方總存活時間生存指數(shù)1:171:34從上表可以看出，配方1:1稀釋液對豬精液的保存效果更好，其總存活時間高于1:3稀釋液。3討論3．1豬精液常溫保存稀釋液配

5、方的設(shè)計稀釋液中影響精子活率的因素很多，主要有溫度、稀釋液的緩沖能力、組分、滲透壓等。本次實驗我們的參考了互聯(lián)網(wǎng)上查詢的商業(yè)配方（Modena商品稀釋液）設(shè)計了我們的配方。在豬豬網(wǎng)中查詢得知在Modena稀釋液中豬液的存活時間可以達到七天。由于實驗室缺少一種緩沖物質(zhì)二羥甲(基)氨基甲烷，根據(jù)滲透壓的計算們用了KCL替代了該物質(zhì)，之所以用KCL是因為強酸鹽只對稀釋液的滲透壓有明顯作用，并不影響其它緩沖對對稀釋液ph值的作用。研究發(fā)現(xiàn)稀釋液PH在5.8較適宜，因為精子本身PH值在7.0～7.5之間，為弱堿性，只有在弱酸性的環(huán)境中才能降低其代謝率，延長其壽命所以我們在本實驗配方中采用了

6、檸檬酸和檸檬酸鹽作為ph緩沖對，同時加入了碳酸氫鈉是為了減少空氣中二氧化碳對稀釋液ph的影響。通過資料查詢我們發(fā)現(xiàn)有研究人員認為用蜜糖代替葡萄糖效果更好，這是由于蜜糖中含葡萄糖、果糖、蔗糖和其他營養(yǎng)成分，并且有抗菌效果，價格低，蜜源豐富做為重要的為精子供能的物質(zhì)，不過因為計算滲透壓比較復(fù)雜我們采用了成分比較單一的葡萄糖和滲透壓非常接近精液的卵黃做為精子的供能物質(zhì)。EDTA是稀釋液中相當重要的一個成分，它是一種螯合劑，能夠與稀釋液中的Ca2+等有害金屬離子結(jié)合成穩(wěn)定的絡(luò)合物，增加精子的存活率。的在同一溫度下保存精液，稀釋液的組分和比例對保存效果起著決定性作用，本試驗我們保存的精子最

7、長存活時間也不過7個小時，保存效果非常不理想，從成份上看稀釋液的成份比較合理,也沒有什么化學(xué)反應(yīng),沒有對精子有害物質(zhì),所以精子存活率不高應(yīng)該不是成分問題。最有可能導(dǎo)致精子存活率不高的原因有兩個,一個是滲透壓問題。在實驗中我們僅僅參照了經(jīng)驗配方?jīng)]有對滲透壓進行精確計算。在對精子的觀察的時候發(fā)現(xiàn)很多類似精子碎片的東西，所以懷疑是稀釋液滲透壓過低了，導(dǎo)致精子吸水破裂，不過因為顯微鏡不是很清晰，破片也不能洗的很干凈影響了觀察效果，所以并不能十分肯定的確定觀察到的確實是精子碎片。另一個影響