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《構(gòu)建人骨保護素在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、編號：200809111刊用形式：論著構(gòu)建人骨保護素在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)張帆1，周艷1，唐鵬1，姜軍1（1第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院乳腺中心，重慶400038）摘要：目的建立過表達(dá)人骨保護素（OPG）的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞克隆。方法 從pOTB7-OPG上獲得OPG基因片段并用PCR方法擴增，將其連接于真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP，酶切鑒定及測序后，轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞，以G418加壓篩選，對轉(zhuǎn)染細(xì)胞行單克隆化，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞行RT－PCR和Westernblot檢測，確定其OPGmRNA和蛋白表達(dá)情況，MTT法檢測過表達(dá)
2、OPG對MDA-MB-231細(xì)胞生長速率的影響。結(jié)果成功構(gòu)建了pIRES2-EGFP-OPG重組質(zhì)粒；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的OPGmRNA和蛋白表達(dá)均較對照升高；過表達(dá)OPG對MDA-MB-231細(xì)胞生長速率無明顯影響。結(jié)論本研究成功建立了過表達(dá)OPG的MDA-MB-231細(xì)胞克隆，為進一步深入探討腫瘤細(xì)胞自身OPG表達(dá)在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展中的作用提供實驗基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：乳腺癌；骨保護素；過表達(dá)；MDA-MB-231細(xì)胞；pIRES2-EGFP中圖法分類號：文獻標(biāo)識碼：AHumanosteoprotegerinconstructedandexpr
3、essedinbreastcancercellZHANGFan,ZHOUYan,TANGPeng,JIANGJun(BreastDiseaseCenter,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract:ObjectiveToconstructMDA-MB-231breastcancercellclonewithosteoprotegerin(OPG)over-expression.MethodsToconstructthere
4、combinantplasmidpIRES2-EGFP-OPG,fulllengthOPGcDNAwithBglIIandEcoRIamplifiedbyPCRwasdigestedandinsertedintoeukaryoticexpressionplasmidpIRES2-EGFP.Afteridentificationofrestrictionendonucleaseandsequencing,therecombinantplasmidandemptyplasmidweretransfectedintoMDA-MB-231cell
5、sbyLipofectamineTM2000,respectively.ThestablytransfectedclonesafterG418screeningwereidentifiedwithRT－PCRandWesternblot.ThedifferentgrowthratesofMDA-MB-231cellswithOPGover-expressionandnormalexpressionweredetectedbyMTT.ResultsTheeukaryoticexpressionplasmidpIRES2-EGFP-OPGwa
6、sconstructedsuccessfully.OPGmRNAandtheproteinlevelofMDA-MB-231cellclonestablytransfectedwithpIRES2-EGFP-OPGwerehigherthanthoseofthestablytransfectedpIRES2-EGFP.OPGover-expressiondidnotchangethegrowthrateofMDA-MB-231cells.ConclusionThebreastcancercellclonewithOPGover-expre
7、ssionwasconstructedsuccessfullyinourstudy.ThiscanprovidearelatedexperimentalbasisforfurtherexploringtheroleofOPGexpressionbytumorcellitselfinthedevelopmentandprogressionofbreastcancerbonemetastasis.Keywords:breastcancer;osteoprotegerin;over-expression;MDA-MB-231cell;pIRES
8、2-EGFP編號：200809111刊用形式：論著骨保護素（Osteoprotegerin，OPG）是近年發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子受體超家族成員[1]，是調(diào)控破骨細(xì)胞活化的關(guān)鍵因素，在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移發(fā)
