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《缺氧誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞腫瘤干樣細(xì)胞形成體外初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、關(guān)于本論文學(xué)術(shù)方面的意見：1、本文為描述新研究，新意不夠；2、建議補(bǔ)充蛋白的生物學(xué)功能或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資料。修改說明：本研究旨在說明缺氧可以誘導(dǎo)分化期膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生逆分化形成腫瘤干樣細(xì)胞。我們經(jīng)過磁珠分選得到CD133-細(xì)胞群，然后對(duì)該細(xì)胞群進(jìn)行缺氧培養(yǎng)。采用單細(xì)胞成球（缺氧成球能力明顯強(qiáng)于常氧培養(yǎng)組），免疫熒光、RT-PCR、Westernbloting檢測(cè)了腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記蛋白（SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133），結(jié)果顯示缺氧組均高表達(dá)，并通過流式細(xì)胞儀證明缺氧培養(yǎng)后CD133+細(xì)胞數(shù)比例逐漸增高。為了驗(yàn)證此理論的正確性，我們還通過細(xì)胞周期及凋亡予以驗(yàn)證，結(jié)果表
2、明，缺氧培養(yǎng)CD133-細(xì)胞群后細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，同時(shí)抗凋亡能力也明顯強(qiáng)于常氧培養(yǎng)組，這些特性也符合了膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特性。因此，我們采用上述方法予以證明缺氧可以誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞逆分化形成腫瘤干樣細(xì)胞。本研究結(jié)果可以很好解釋膠質(zhì)瘤術(shù)后為何高復(fù)發(fā)，并為高壓氧治療膠質(zhì)瘤提供另一科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，本研究也證明了膠質(zhì)瘤干細(xì)胞除了來源于正常神經(jīng)干細(xì)胞突變外，膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生逆分化形成膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞也可能是其來源的重要途徑之一。缺氧誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞腫瘤干樣細(xì)胞形成體外初步研究汪攀，趙秀文，蘭川，吳南（400038重慶，第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院神經(jīng)外科）[摘要]目的通過體外研究初步探討缺氧可以誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤
3、細(xì)胞逆分化形成腫瘤干樣細(xì)胞。方法（1）采用CD133+細(xì)胞免疫磁珠分選法分離膠質(zhì)瘤細(xì)胞得到CD133-細(xì)胞群。（2）將CD133-U87、GL261細(xì)胞系制成單細(xì)胞懸液并種植一個(gè)細(xì)胞于96孔板內(nèi)，分別行缺氧及常氧培養(yǎng)，觀察單細(xì)胞生長(zhǎng)情況。（3）缺氧處理CD133-細(xì)胞48小時(shí)后行免疫熒光染色鑒定腫瘤干細(xì)胞樣標(biāo)記蛋白（SOX2，OCT-4，KLF-4，Nanog，CD133）表達(dá)情況，并分別缺氧處理0、3、6、9、12、24h及0、12、24、48、72h行qRT-PCR及Westernblot檢測(cè)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞缺氧培養(yǎng)后CD133+細(xì)胞比例變化，檢測(cè)時(shí)間為缺氧培養(yǎng)1、3、
4、5、7天。（4）缺氧處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞1、3、5、7天后流式分析細(xì)胞周期及凋亡改變。結(jié)果1.單個(gè)CD133-膠質(zhì)瘤細(xì)胞缺氧培養(yǎng)后呈懸浮球樣生長(zhǎng)，常氧培養(yǎng)仍為單個(gè)死亡細(xì)胞，即缺氧培養(yǎng)組成球率明顯高于對(duì)照組（P≤0.001）。2.熒光檢測(cè)結(jié)果表明,腫瘤干細(xì)胞樣標(biāo)記蛋白在CD133-膠質(zhì)瘤細(xì)胞缺氧處理48h后高表達(dá)；qRT-PCR及Westernblot檢測(cè)結(jié)果表明，缺氧處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以明顯上調(diào)腫瘤干細(xì)胞樣蛋白表達(dá)（P<0.05）,其中qRT-PCR顯示SOX-2，OCT-4及Nanog最高表達(dá)在缺氧后9h，KLF-4及CD133在缺氧后12h表達(dá)最高。Westernblot蛋白檢測(cè)顯示OC
5、T-4最高表達(dá)在缺氧后12h，CD133表達(dá)最高在缺氧24h后，KLF-4及Nanog最高表達(dá)則在缺氧48h后，SOX-2在缺氧72h后表達(dá)量最高。另外隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，CD133+細(xì)胞數(shù)比例逐漸升高（P<0.05）。3.細(xì)胞周期結(jié)果提示缺氧處理腫瘤細(xì)胞后，G0/G1期延長(zhǎng)，G2/M+S縮短（P<0.05）；凋亡結(jié)果提示常氧培養(yǎng)組更易凋亡（P<0.05）。結(jié)論缺氧可以誘導(dǎo)CD133-膠質(zhì)瘤細(xì)胞腫瘤干樣細(xì)胞形成。[關(guān)鍵詞]缺氧；膠質(zhì)瘤；腫瘤干樣細(xì)胞；Cancerstem-likecellscanbeinducedunderhypoxiaconditionsingliomacellsW
6、angPan,ZhaoXiuwen,LanChuan,WuNan(DepartmentofNeurosurgery,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038,China）[Abstract]ObjectiveToexplorewhethercancerstem-likecellscanbeinducedunderhypoxiaconditionsingliomacells.MethodsU87,GL261andPrimarygliomacellswereculturedinDMEM/F12+10
7、%FBSandCD133-cellsweresortedthroughmagnetic-activatedcellsorting(MACS).SingleCD133-cellwastransferredto96-wellplates(n=6)containing170μlserumfreeDMEM/F12medium.Threeofthemwereculturedin1%O2,andothersin21%O2for21days;at0,3,7,14or21
