體外誘導(dǎo)生成人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞及向肝細(xì)胞樣細(xì)胞分化的研究

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1、＾Ｈ■＾網(wǎng)＾Ｂ＾＾ｕＩＨｓｓｌｍｉｓｌ分類號：Ｒ５１２．６密級：公開體外誘導(dǎo)生成人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞及向肝細(xì)胞樣細(xì)胞分化的研究ＴｈｅＳ化ｄｙｏｆ化ｅｉｎｄｕｅ村ｏｎｏｆｈｕｍａｎｉｎｄｕｃｅｄｐ山ｒｉｐｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ化ｈｅｐａｔ：ｏｃｙｔｅｌｉｋｅｃｅｌｌｓｉｎｖｉ化〇？作者姓名：王建軍學(xué)科專業(yè)：內(nèi)科傳染病導(dǎo)師：辛紹杰、貌盼勇教授答辯委頂會主席：論文答辯日期—：二０五年五月二十八日院校地址：北京市復(fù)興路２８號郵政編碼：

2、１００８５３解放軍醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明＂＂、，秉承我院忠誠敬業(yè)、和諧、創(chuàng)新的學(xué)風(fēng)本人聲明：所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位及證書而使用過的材料，對本文的研究作出貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中做了明確的說明并表示謝意。＾申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：：ｖｙ．．討家刖月興Ｘ指導(dǎo)教師簽名；戶備円期：抑４７＾解

3、放軍醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人保證畢業(yè)離院后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為解放軍醫(yī)學(xué)院或解放軍總醫(yī)院、復(fù)。學(xué)院有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文原件印件和電子版本，可Ｗ采用影印、縮印、掃描或其它手段保存論文Ｗ供被查閱和借閱。。學(xué)院可Ｗ公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容（保密內(nèi)容除外）：：八ｒ論文作者簽名２采杏円期義，指導(dǎo)教師簽名刖月：戶心解放軍醫(yī)學(xué)院博＋學(xué)位論文目錄中ｉ摘耍１英ｉ摘耍三３前胃５一第部分人包皮成鐘維細(xì)胞誘導(dǎo)生成誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞８材料與方法８實(shí)驗(yàn)結(jié)果１９

4、ｉ城２２２４小拿第：＿：部分誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的多能性的鑒定２５材料與方法２５實(shí)驗(yàn)結(jié)果３２職３５小結(jié)３７第二部分Ｉｐｓ細(xì)胞誘導(dǎo)為肝細(xì)胞樣細(xì)胞３８材料與方法３８實(shí)驗(yàn)結(jié)果４９職５２?。墸担矗崳姡牐樱壍谒牟糠郑桑穑蠹?xì)胞對小鼠肝損傷恢復(fù)的影響的初步研究５５材料與方法５５實(shí)驗(yàn)結(jié)果５７６討論１小結(jié)６３總結(jié)６４參考ｉ獻(xiàn)６５文獻(xiàn)綜述７０攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況７８ｍ７９ｉｉ解放軍睦學(xué)院博＋學(xué)位論文作者：王建軍學(xué)科專業(yè)：內(nèi)科傳染病學(xué)導(dǎo)師：辛紹杰、

5、貌盼勇體外巧導(dǎo)生成人巧導(dǎo)性多能干細(xì)胞及向肝細(xì)胞樣細(xì)胞分化的研究中文摘要研究背景：目前針對肝衰竭的治療手段中最有效的為肝臟移植治療但由于，供體的嚴(yán)重短缺無法進(jìn)行普遍推廣。人工肝支持系統(tǒng)可哲時(shí)脊代肝臟功能，，幫助病人渡過肝衰竭危檢期等待肝細(xì)胞再生，或維持病人生存至得到合適的供體進(jìn)行肝移植。生物人工肝是目前認(rèn)為最理想的人工肝，但其發(fā)展受限于肝細(xì)胞來源問題。干細(xì)胞由于具有轉(zhuǎn)化為各種類型組織細(xì)胞的能力，可能為人工肝治療的肝細(xì)胞新的來源。胚胎干細(xì)胞可具有良好的多潛能性，可分化為多種人體組織細(xì)胞，但其應(yīng)用受到倫理學(xué)的限制。自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

6、私外周血干細(xì)胞獲取數(shù)量有眼，難Ｗ建立細(xì)胞系，不能滿足生物型人工肝所需要護(hù)增的數(shù)量及也不夠穩(wěn)定。誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞與胚胎干細(xì)胞同樣具有自我更新、增殖和分化的特性卻，，避免了應(yīng)用胚胎干細(xì)胞研究所需要面臨的倫理問題和法律問題，可Ｗ避免目前常用的異種及腫瘤巧細(xì)胞應(yīng)用于生物人工肝的主要缺點(diǎn)可能成為治療終末期肝衰，竭新的肝細(xì)胞來源，其臨床應(yīng)用將具有廣闊的前景。目的一：將人包皮成纖維細(xì)胞ｓ細(xì)胞誘導(dǎo)為，進(jìn)步誘導(dǎo)為肝細(xì)胞樣細(xì)胞為ｉｐ，人工肝支持治療提供新的肝細(xì)胞來源。＇Ｓｏｘ２Ｋ－Ｍ方法：Ｗ逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體將Ｏｃｔ４ｌｆ４和ｃｃ，，ｙ因子導(dǎo)入人包皮

7、成纖維細(xì)胞中，在體外應(yīng)用ｈＥＳ細(xì)胞專用培養(yǎng)體系，培養(yǎng)病毒感染后體細(xì)胞促使其，一誘導(dǎo)為ｉＰＳ細(xì)胞。進(jìn)步通過ＡＰ染色、免疫焚光染色，核型鑒定、類胚體形成、脖胎瘤形成等實(shí)驗(yàn)鑒定所誘導(dǎo)的ｉＰＳ細(xì)胞具有類似ＥＳ細(xì)胞的全能性。對實(shí)驗(yàn)中所獲得的ｉｐｓ細(xì)胞，在體外經(jīng)加入不同的刺激因子，誘導(dǎo)ｉｐｓ細(xì)胞先分化為內(nèi)化層細(xì)胞，進(jìn)而分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞。誘導(dǎo)過程中各階段的標(biāo)志物經(jīng)免疫燙光染色及流式染色驗(yàn)證分化效率。獲得的肝細(xì)胞樣細(xì)胞經(jīng)Ｅｌｉｓａ方法檢測ＡＬＢ的分泌量ＰＡＳ，民Ｔ－ＰＣ民及Ｒｅａｌ－ｔＣ民檢測染色檢測糖原膽存功能ｉｍｅＰ特異性基因的表達(dá)。