構建sirna慢病毒載體調(diào)控人牙髓干細胞delta1表達的實驗研究

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時間:2019-01-06

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1、構建siRNA慢病毒載體調(diào)控人牙髓干細胞Delta-1表達的實驗研究王雪飛,張綱,裘松波,何飛,譚穎徽,吳小波,汪蕾(第三軍醫(yī)大學新橋醫(yī)院口腔科,重慶400037)摘要:目的構建Notch配體Delta-1基因慢病毒干擾載體及建立Delta-1基因穩(wěn)定干擾的人牙髓干細胞系。方法將Delta-1基因特異性siRNA靶序列與雙酶切慢病毒載體pGCSIL-GFP連接,轉(zhuǎn)化,挑取陽性克隆進行PCR鑒定;利用包裝細胞293T獲得重組的慢病毒,感染人牙髓干細胞,分作DPSCs/Delta1-RNAi組、DPSCs/vector組和DPSCs/wt組;RT-PCR和We

2、sternblot分別檢測Delta-1mRNA及蛋白的表達。結果經(jīng)PCR和DNA測序鑒定,成功構建Delta-1特異性siRNA的慢病毒載體,并感染牙髓干細胞;經(jīng)檢測DPSCs/Delta1-RNAi組Delta-1mRNA及蛋白表達較DPSCs/vector組和DPSCs/wt組明顯降低,DPSCs/vector組和DPSCs/wt組之間無明顯差異。結論通過成功構建的Delta-1特異性siRNA慢病毒載體對人牙髓干細胞的轉(zhuǎn)染實現(xiàn)了對其Delta-1mRNA和蛋白的調(diào)控。關鍵詞:Delta-1;Notch信號通路;RNA干擾;慢病毒;人牙髓干細胞中圖法

3、分類號:R780.2文獻標識碼:ARegulationofExpressiononDelta-1GeneinDPSCsbyspecificsiRNALentivirusVectorWANGXue-fei,ZHANGGang,QIUSong-bo,HEFei,TANYing-hui(DepartmentofStomatology,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037)Abstruct:Objective:ToconstructalentivirusvectorforRNA

4、interference(RNAi)ofDelta-1geneandestablishhumandentalpulpstemcellswithDelta-1genewereinhibited.Method:Delta-1specificsiRNAwasligatedwithdoubledigestedLentivirusvectorpGCSIL-GFPandobtainedthepositivecoloniesthatwerePCRscreened,DPSCswereinterferedanddividedintoDPSCs/Delta1-RNAigrou

5、p,DPSCs/vectorgroupandDPSCs/wtgroup,andverifiedbyRT-PCRandwesternblot.Result:TheligationofDelta-1specificsiRNAtothedoubledigestedlentivirusvectorpGCSIL-GFPwassuccessful.Delta-1andDelta-1mRNAexpressionofDPSCs/Delta1-RNAigroupwassignificantlyhigherthantheDPSCs/vectorgroupandDPSCs/wt

6、group,buttherewasnodifferentbetweentheDPSCs/vectorgroupandDPSCs/wtgroup.Conclusion:ThesuccessfulconstructionofDelta-1specificsiRNAlentivirusvectorsandtheregulationofexpressiononDelta-1GeneinDPSCsenrichedbasictheoryonfurtherstudyinproliferationordifferentiationofDPSCsandrepairfunct

7、ionofdamageddentalpulp.KeyWords:Delta-1;notchsignal;siRNA;lentivirus;humandentalpulpstemcellsNotch信號通路是一條進化上十分保守的信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng),廣泛存在于無脊椎動物和脊椎動物的多個物種之中。其在胚胎、心血管、血細胞發(fā)育以及腫瘤發(fā)生等生理、病理過程中發(fā)揮重要作用,通過細胞間相互作用的方式精確地調(diào)節(jié)著細胞的分化、增殖和凋亡,在生物體發(fā)育過程中決定著細胞的不同命運[1-3]。本實基金項目:重慶市自然科學基金(CQCTSC,2007BB5016);第三軍醫(yī)大學科研基金(

8、2006D136)作者簡介:王雪飛,女,內(nèi)蒙古呼和浩特市人,碩士研

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